(FBIOyF) Producción de Grado - Tesinas, Residencias Educativas, Trabajos Finales
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Ítem Embargo Identificación de biomarcadores seminales con utilidad pronóstica en tratamientos de reproducción asistida(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2024) Velásquez, Sabrina; Spinelli, Silvana V.; Grosso, JulietaEl factor masculino es responsable de aproximadamente la mitad de los casos de infertilidad en las parejas. Un desafío importante en andrología son los pacientes con parámetros seminales normales que no logran embarazar a sus parejas, no habiéndose encontrado causas de infertilidad femenina. A dichos casos se los denomina como infertilidad masculina inexplicada (UMI, por sus siglas en inglés). En la actualidad, el espermograma constituye el análisis clásico para el diagnóstico de infertilidad masculina. Sin embargo, este método tiene una utilidad limitada para evaluar calidad espermática y no es apropiado para predecir el desarrollo embrionario en tratamientos in vitro. Esto expone la necesidad de hallar nuevos biomarcadores capaces de evaluar la calidad espermática, que complementen la información provista por los análisis clásicos. En este sentido, los ARNs derivados de ARNt inducidos por estrés (tiARNs), se han propuesto como potenciales biomarcadores de infertilidad masculina. Se ha demostrado la existencia de asociaciones entre la expresión aberrante de estas moléculas y distintos tipos de infertilidad. Por este motivo, en este trabajo de tesina se estudió el potencial empleo de la cuantificación de 5’-tiARNs abundantes en plasma seminal como biomarcadores pronósticos en procedimientos de reproducción asistida. Para llevar a cabo los objetivos propuestos se realizó un estudio prospectivo con parejas que se sometieron a uno o más tratamientos de ICSI (inyección intracitoplasmática de espermatozoides) con ovocitos donados, para minimizar los posibles factores de infertilidad femenina, en el Centro Médico PROAR. En función del resultado del procedimiento las muestras de plasma seminal fueron divididas en tres grupos: ICSI (+), parejas que lograron el embarazo, 1FIC, aquellas que realizaron solo un ciclo sin embarazo (en inglés, “1 failed ICSI cycle”) y +2FIC, parejas que se sometieron a más de un procedimiento de ICSI sin éxito (posibles casos de UMI). Específicamente para esta tesina se incorporaron al estudio 17 nuevas muestras de semen, alcanzando un n total de 59 (31 ICSI (+), 17 1FIC y 11 +2FIC). Luego se cuantificaron por RT-qPCR los niveles de 5´-tiARN-Gly , 5´-tiARN-Glu , 5´-tiARN-Lys , 5´-tiARN-Val, todos ARNs pequeños abundantes y potencialmente funcionales en plasma seminal según diversos relevamientos bibliográficos y nuestros estudios preliminares. Las cuantificaciones realizadas por RT-qPCR no arrojaron asociaciones significativas entre los niveles de dichas moléculas y el éxito/fracaso de los procedimientos de ICSI, en oposición a resultados preliminares del laboratorio. En la cohorte analizada, esta técnica mostró limitaciones en cuanto a sensibilidad y reproducibilidad, razón por la cual se llevó a cabo la puesta a punto de una técnica alternativa para dicho fin, la ddPCR, que promete una sensibilidad superior y resistencia a los inhibidores de la PCR. La cuantificación de 5’-tiARN-Gly seminal mediante ddPCR mostró niveles significativamente superiores de esta molécula en el grupo de pacientes con reiterados procedimientos de ICSI fallidos, lo que coincide con investigaciones previas del laboratorio. En líneas generales, la ddPCR demostró ser un método superador a la RT-qPCR para la cuantificación de estos marcadores en plasma seminal, en términos de los niveles de detección alcanzados y el coeficiente de variación de los datos. La incorporación de tiARNs en los espermatozoides ocurre durante su maduración en el epidídimo. Este órgano está poblado por macrófagos que, integrando señales sistémicas, regulan el funcionamiento del epidídimo a través de metabolitos producidos por estas células. En esta tesina también se inició la caracterización de los mecanismos que regulan la producción y secreción de 5’-tiARNS en el epitelio epididimal mediante estudios in vitro, evaluando el rol de mediadores inmunoendócrinos. Para explorar la comunicación epiteliomacrófago tisular, desarrollamos un modelo in vitro empleando macrófagos derivados de la línea celular monocítica humana THP-1. Estas células fueron tratadas con dexametasona (D), un glucocorticoide sintético derivado del cortisol, para emular una respuesta sistémica al estrés y en dichas condiciones se determinó la producción de 5'-tiARNs y de la enzima central de su síntesis, angiogenina.Nuestros resultados demuestran que ante el tratamiento con glucocorticoides, los macrófagos liberan 5’-tiARNs al medio extracelular de manera dosis dependiente, sugiriendo un potencial rol de estas moléculas en la comunicación intercelular. En suma, los estudios realizados en este trabajo de tesina validan un perfil de ARNs pequeños alterado en plasma seminal de pacientes normozoospérmicos que se sometieron a más de un ciclo fallido de ICSI con ovocitos donados (posibles casos de UMI) y demuestran la superioridad de la técnica ddPCR respecto a la RT-qPCR para la cuantificación de estas moléculas. Asimismo, nuestros estudios in vitro en la línea celular THP-1 aportar información preliminar de relevancia para la caracterización del rol del macrófago residente en la respuesta inmunoendócrina del tejido epididimal.Ítem Embargo Investigación de la presencia de indicadores microbiológicos de calidad y agentes potencialmente tóxicos en aguas de consumo de zonas aledañas a Rosario(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2024) Viola, Emilia; Cholich, Valeria María; Casabonne, CeciliaLa mayor parte de los problemas de salud relacionados con el consumo de agua pueden atribuirse a la presencia de microorganismos patógenos y sustancias químicas en el suministro. Con el aumento de la población en las áreas cercanas a Rosario, se ha observado que algunos hogares no tienen acceso a agua potable en la vivienda. El objetivo fue determinar parámetros fisicoquímicos y microbiológicos de muestras de aguas utilizadas para consumo provenientes de diferentes fuentes de abastecimiento de los departamentos Rosario y San Lorenzo. Se obtuvieron 38 muestras de agua recolectadas de conexiones de red, canillas comunitarias y pozos en domicilios pertenecientes a las localidades de Funes, Alvear, Ibarlucea, General Lagos, Pueblo Esther y Pérez. Asimismo, se realizaron encuestas anónimas para evaluar el impacto de la calidad del agua sobre la salud de la población. De las muestras obtenidas se evaluaron las características organolépticas, pH y compuestos nitrogenados. Además, se determinaron los indicadores microbiológicos de acuerdo a lo establecido por el Código Alimentario Argentino. El 74% (n=28) de las muestras estudiadas no fueron aptas para consumo, ya que presentaron niveles elevados principalmente de NO3-, bacterias mesófilas viables, bacterias coliformes, presencia de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa. Permitiendo concluir que el agua utilizada en viviendas de localidades aledañas a Rosario no resultó apta para consumo humano, representando un riesgo potencial para la salud y acentuando la problemática que existe en la región, especialmente en lo que respecta a las fuentes subterráneas.Ítem Embargo Expresión de la fosfolipasa ChPLC en Corynebacterium glutamicum(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2024) Leopold, Constanza; Paoletti, LucianaLa creciente demanda de bioprocesos industriales más sostenibles ha motivado el reemplazo de tratamientos químicos por alternativas enzimáticas, más eficientes y ambientalmente amigables. En este contexto, el desarrollo de plataformas robustas para la producción de enzimas recombinantes se vuelve clave para alcanzar escalabilidad y reducir costos. Aunque Escherichia coli y Pichia pastoris son los hospedadores más utilizados, presentan limitaciones en términos de secreción y escalabilidad. Frente a este escenario, el presente trabajo se enmarca en la optimización de una plataforma de expresión en Corynebacterium glutamicum, un hospedador alternativo con características promisorias para la producción de enzimas industriales. El objetivo de este trabajo fue establecer una plataforma para la producción extracelular de ChPLC en Corynebacterium glutamicum ATCC 13869, un microorganismo GRAS con reconocida capacidad de secreción y ventajas operativas en bioprocesos industriales. Se evaluaron diferentes estrategias de expresión: la integración del gen en el cromosoma y su expresión a partir de plásmidos replicativos, combinadas con alternativas en las señales de secreción, asociadas a las vías Sec y Tat. Se diseñaron y construyeron las correspondientes cepas, cuyos parámetros de crecimiento y producción de la enzima de interés fueron determinados. Para este fin se analizaron distintas condiciones de crecimientos, incluyendo medios definidos y cultivos en batch y de alta densidad celular, con el fin de identificar parámetros clave para optimizar la expresión y secreción de la enzima. Este trabajo sienta las bases para el desarrollo de procesos fermentativos orientados a reemplazar tratamientos químicos convencionales por alternativas más sustentables y eficientes.Ítem Embargo Caracterización fisicoquímica y estructural de harina de arveja amarilla modificada por fermentación en estado sólido(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025) Cossia, María Belén; López, Débora NataliaEl presente Trabajo Final tuvo como objetivo reducir el contenido de antinutrientes en la harina de arveja amarilla mediante fermentación en estado sólido con kéfir, y caracterizar las propiedades fisicoquímicas y estructurales de la harina fermentada. Se determinó que la relación harina:inóculo 1:1,5 y un tiempo de 30 h fueron las más adecuadas para favorecer la actividad fermentativa, reducir significativamente el contenido de taninos condensados y ácido fítico, e incrementar el contenido de aminoácidos libres. Asimismo, se observaron cambios en algunas propiedades fisicoquímicas: la fermentación aumentó la capacidad de retención de agua, disminuyó la densidad aparente y aumentó el índice de amarillez de la harina; aunque no se observaron cambios en la capacidad de retención de aceite. El análisis de viscosidad sugiere que la fermentación no perjudicó la capacidad de dicha harina para formar una pasta viscosa o gel después de la cocción y el enfriamiento. A su vez, el análisis estructural mediante ATR-FTIR y difracción de rayos X indicó que no se observaron alteraciones significativas en la estructura cristalina del almidón ni en los grupos funcionales de la matriz de la harina. Los resultados obtenidos sugieren que las modificaciones inducidas por la fermentación mejorarían la calidad nutricional de la harina sin afectar negativamente la funcionalidad necesaria para su aplicación en productos alimentarios.Ítem Embargo Remediación de aguas subterráneas contaminadas con especies tóxicas inorgánicas empleando el sorbente híbrido quitosano-microagregados de óxidos de hierro. Optimización del proceso mediante el uso de diseños factoriales(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025) Gribaudo, Lina; González, Juan CarlosEl agua es un recurso indispensable para los seres vivos, por eso es urgente abordar la problemática causada por su contaminación. El Arsénico (As) es un contaminante tóxico y es probable encontrarlo principalmente en aguas subterráneas. Para lograr el control y su remoción se cuentan con técnicas de remediación, la biosorción es eficiente y se basa en la utilización de biosorbentes de bajo costo, amigables con el medio ambiente, reutilizables y biodegradables. El quitosano (Q) es un biosorbente eficiente, es un polímero que se obtiene a partir de la quitina (presente en los exoesqueletos de distintos crustáceos, insectos, etc.). Además, el Q puede combinarse con óxidos de hierro, como la magnetita (M), para potenciar sus propiedades y lograr aumentar la sorción de As. Este trabajo presenta un estudio de remoción del As(V) de agua de pozo de la localidad de Andino, Santa Fe, Argentina. Se utilizó un proceso de sorción en lote y como sorbente el polímero Q y un híbrido polimérico M-Q en forma de perlas gelificadas. Para optimizar el proceso se evaluaron algunos de los parámetros que podrían afectar significativamente el porcentaje de remoción de As (%R) o respuesta. Para ello se realizó un diseño factorial que nos brindó las condiciones óptimas de sorción. Los factores estudiados fueron pH, masa de sorbente y tiempo de contacto contaminante-sorbente. El diseño experimental fue realizado separadamente con Q y M-Q y mostró que los tres factores y las interacciones entre ellos modificaron significativamente %R. La combinación de M-Q aumentó el %R de 17% a 85%. Además, se caracterizaron los materiales sorbentes aplicando difracción de rayos X (DRX) y determinando el pH de carga cero. Para la determinación cuantitativa de As(V) se puede utilizar métodos espectrofotométricos: a) Dietiditiocarbamato de plata (DDCAg) y b) azul de molibdeno. En este trabajo se utilizó la técnica recomendada del DDCAg.Ítem Embargo Estudio de la interacción de TcHMGB con otras proteínas en el contexto nuclear del parásito Trypanosoma cruzi(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025) Vernetti Tauil, Alma; Cribb, Pamela; De Hernández, María AzulEl parásito Trypanosoma cruzi (T. cruzi), es el agente etiológico de la enfermedad de Chagas, una enfermedad endémica global de gran importancia en América Latina. Actualmente solo existen dos medicamentos para tratarla, ambos efectivos en la etapa aguda de la enfermedad, pero no durante la etapa crónica. T. cruzi posee un genoma con una estructura y una regulación génica inusual para eucariotas: sus genes se transcriben en tándem en grandes unidades policistrónicas y carece de promotores canónicos y de factores de transcripción clásicos. En este contexto, los mecanismos de regulación epigenética adquieren un rol central en el control del inicio de la expresión génica y otros procesos nucleares. Las High Mobility Group B (HMGB) son un grupo de proteínas consideradas factores arquitectónicos de la cromatina, muy conservadas en eucariotas. En nuestro grupo de investigación, hemos identificado y caracterizado la proteína HMGB de T. cruzi (TcHMGB), la cual comparte dominios de unión al ADN con sus ortólogas, pero cuenta con un extremo amino terminal (N-terminal) exclusivo de kinetoplástidos. Hemos observado que TcHMGB se expresa en el núcleo en todas las etapas del ciclo de vida del parásito, que reconoce y se une de manera preferencial a estructuras distorsionadas del ADN, que puede inducir curvatura en la doble hélice y que modifica la estructura de la cromatina haciéndola más laxa. Ensayos de RNA-seq con parásitos sobreexpresantes de TcHMGB, sugieren que la proteína tendría un rol global en la transcripción de genes, particularmente en la región disruptiva del genoma. Consideramos que TcHMGB podría estar afectando esta región al unirse y hacer más laxa la cromatina. Para continuar con el estudio de esta proteína, que parece ser esencial para el parásito, decidimos identificar con qué proteínas interectúa en el entorno nuclear utilizando la técnica de marcado por proximidadbcon TurboID. Con este fin, obtuvimos un plásmido capaz de expresar TcHMGB fusionada a TurboID y a una etiqueta de 3 HA, cuya identidad verificamos por PCR, digestión con enzimas de restricción y secuenciación. Posteriormente, utilizamos este plásmido para transfectar una cepa de T. cruzi y obtuvimos parásitos capaces de expresar la proteína de fusión (3xHA-TurboID-TcHMGB) bajo inducción con tet. Evaluamos la presencia del plásmido en los parásitos por PCR, verificamos expresión de la proteína mediante Western blot, y corroboramos que posee localización nuclear realizando ensayos de inmunocitolocalización. Además, optimizamos la concentración del inductor necesaria para realizar futuros ensayos de interactómica basados en marcado por proximidad con TurboID. Así logramos obtener una cepa de T. cruzi que permitirá realizar ensayos para determinar el perfil de interactómica de TcHMGB en el entorno nuclear, para poder determinar con más detalle su rol en la regulación de la expresión génica y/u otros procesos nucleares.Ítem Embargo Diseño, desarrollo y validación funcional de un ensayo de secuenciación de paneles de genes para el diagnóstico genético(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025) Paredes, Franco; Colaneri, Alejandro; Baya , ArielEn este trabajo se abordó el desarrollo y la validación funcional de una técnica para la obtención de variantes genéticas humanas a partir de una muestra de sangre. Se planteó un protocolo que consiste en los pasos que inician en la extracción de ADN a partir de una muestra con EDTA. Se adaptó un protocolo comercial para la captura por hibridación de secuencias blanco. Una vez obtenido el archivo fastq se le realizaron los análisis de calidad correspondientes, los mismos resultaron satisfactorios. El mapeo de las secuencias se llevaron a cabo con el software bwa. A partir de este alineamiento, se procedió a realizar las prácticas recomendadas por el Broad Institute para la obtención de variantes. El análisis final consistió en la búsqueda en bases de datos de las más de 400 variantes encontradas para la identificación de su significancia clínica. Se deja asentado que para la validación clínica final del método se deberá contar con controles extra y mayor cantidad de muestras.Ítem Embargo Regulación del apetito en Caenorhabditis elegans mediada por malonil-CoA(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025) López Crespo, Ramiro; Mansilla, María CeciliaLa regulación del apetito es un proceso altamente conservado que integra señales metabólicas y neuronales para asegurar el balance energético. En mamíferos, el malonil-CoA actúa como un regulador clave al inhibir la actividad enzimática o función de las carnitina palmitoiltransferasas (CPT). Estudios recientes proponen que mecanismos análogos podrían operar en Caenorhabditis elegans, donde variaciones en los niveles neuronales de malonil-CoA afectan la conducta alimentaria. Mediante análisis informático sobre el genoma de C. elegans se identificaron 10 genes ortólogos de los genes CPT1A, CPT1B y CPT1C humanos. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar el rol de dos isoformas de CPT en la modulación del apetito del nematodo, cpt-1 y cpt-5, así como explorar el efecto de endocannabinoides y fitocannabinoides sobre el comportamiento alimentario. Para ello, se realizaron ensayos de interferencia por ARN (ARNi) dirigidos contra cpt-1 y cpt-5 en dos cepas del gusano: N2, insensible a ARNi neuronal, y MAH677, que permite el silenciamiento exclusivamente en neuronas. El apetito se cuantificó mediante la medición de la tasa de bombeo faríngeo, mientras que la acumulación total de lípidos se evaluó mediante tinción con Rojo Nilo. Adicionalmente, se analizó el efecto del endocannabinoide 2-araquidonilglicerol (2AG) y de los fitocannabinoides cannabidiol (CBD), tetrahidrocannabinol (THC) y cis-THC-C1 sobre la ingesta en la cepa MAH677. En la cepa N2, el knockdown de cpt-1 o cpt-5 no produjo cambios significativos en la tasa de bombeo. En contraste, en la cepa MAH677 ambos silenciamientos generaron una disminución marcada del bombeo faríngeo, indicando un rol de estas isoformas en la regulación del apetito a nivel neuronal. Los ensayos de acumulación lipídica no mostraron correlación directa con los cambios en ingesta. Finalmente, el tratamiento con 2AG produjo un aumento significativo del bombeo faríngeo, mientras que el CBD indujo su disminución y el THC y cis-THC-C1 no mostraron efectos detectables. En conjunto, estos resultados sugieren que CPT-1 y CPT-5 participan en un circuito neuronal de control del apetito en C. elegans, y establecen las bases para futuros estudios mecanísticos sobre la vía regulada por malonil-CoA.Ítem Embargo Aprovechamiento del lactosuero en la elaboración de dulce de leche(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025) González Wachendorff, Sol; Boeris, Valeria; Baldor, SofíaEl suero lácteo es uno de los principales subproductos de la industria quesera y, debido a su alta carga orgánica, supone un desafío ambiental cuando no se gestiona adecuadamente. Sin embargo, su contenido de lactosa, proteínas de valor biológico y minerales lo convierte en un recurso con potencial para ser revalorizado dentro de un enfoque de economía circular. En este contexto, su incorporación en alimentos ampliamente aceptados, como el dulce de leche, surge como una alternativa tecnológica viable y ambientalmente sostenible. Este trabajo abordó la formulación y caracterización de cinco muestras de dulce de leche con sustituciones progresivas de leche por suero lácteo. Se observó que el aumento de suero lácteo redujo el rendimiento final del producto. Paralelamente, se registraron incrementos en la viscosidad, el comportamiento elástico, la dureza y la adhesividad, mientras que parámetros como pH, actividad de agua, azúcares reductores, elasticidad y cohesividad se mantuvieron similares al control. En cuanto al color, las muestras con mayor sustitución presentaron mayor luminosidad y menor tonalidad amarilla, atribuible a una reducción en la formación de compuestos de Maillard. El análisis del mercado evidenció la presencia de productos que ya utilizan derivados de suero y una notable diversidad de formulaciones, lo que favorece la incorporación de un dulce de leche con suero lácteo. Finalmente, la evaluación del consumidor mostró una alta aceptación del producto propuesto.Ítem Embargo Caracterización de microalgas nativas y transgénicas. Estudio de propiedades de interés biotecnológico(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2024) Lehmann, Ana; Barchiesi, JulietaLas microalgas son microorganismos fotosintéticos, unicelulares o pluricelulares, que se encuentran en ambientes acuáticos diversos como océanos, lagos y ríos. A pesar de su tamaño microscópico, desempeñan un papel crucial en los ecosistemas debido a su capacidad para realizar fotosíntesis, produciendo oxígeno y fijando carbono, lo que contribuye significativamente a la mitigación del cambio climático. Además, son ricas en compuestos bioactivos como proteínas, lípidos, vitaminas y antioxidantes, útiles como suplementos para nutrición tanto animal como humana y con diversas aplicaciones en la industria. El género Scenedesmus, ampliamente distribuido en aguas dulces, es notable por su capacidad de adaptación a condiciones ambientales extremas y su eficiencia en la biorremediación de aguas residuales. Esta microalga contiene altos niveles de proteínas y lípidos, lo que la hace ideal para la producción de biocombustibles y otros productos de valor añadido. Scenedesmus es un ejemplo de cómo las microalgas combinan simplicidad estructural con funcionalidad compleja, ofreciendo aplicaciones ecológicas e industriales valiosas. En el presente trabajo de tesina se continuó la caracterización de cepas de Scenedesmus transgénicas obtenidas anteriormente en el laboratorio. Estas cepas fueron transformadas genéticamente para expresar un dominio de unión a almidón en sus paredes celulares, generando así dos nuevas líneas: SBD2 y SBD3. Demostramos que estas variantes poseen una mayor velocidad de floculación, sus suspensiones presentan una mayor viscosidad, y contienen una mayor cantidad de pectina en sus paredes celulares en comparación con la cepa silvestre. Comprobamos también que presentan un incremento en su contenido de aminoácidos. Debido al actual interés en la aplicación industrial de las microalgas por su capacidad para producir compuestos de valor agregado -como bioestimulantes, biofertilizantes y biopesticidas- y de su potencial empleo en la biorremediación de aguas contaminadas, las cepas obtenidas podrían llegar a representar una ventaja competitiva en estos rubros.Ítem Acceso Abierto Evaluación de una proteína de Trypanosoma cruzi como posible marcador diagnóstico(2021) De Hernández, María Azul; Cribb, Pamela; Villar, Silvina Raquel; https://orcid.org/0000-0001-9285-385XLa proteína High Mobiliy Group B de Trypanosoma cruzi (TcHMGB), al igual que otros miembros de la familia HMGB, participa en importantes procesos nucleares por su capacidad de alterar la estructura de la cromatina. Más allá de sus funciones nucleares, en mamíferos, la proteína HMGB1 (mHMGB1) puede ser secretada al medio extracelular bajo condiciones de estrés celular y actuar como “patrón molecular asociado a daño” (DAMP) mediando procesos inflamatorios. Mediante ensayos in vitro e in vivo, observamos que TcHMGB es capaz de inducir una respuesta inflamatoria y es detectada en cortes de tejido de un modelo de infección murino con la cepa Tulahuén de T. cruzi, tanto en células infectadas como en la región extracelular, lo que sugiere que TcHMGB sería secretada durante la infección. A partir de estos antecedentes, decidimos evaluar su potencialidad como marcador de la infección y su posible aplicación para el diagnóstico de la enfermedad de Chagas. En primer lugar, se realizó un análisis bioinformático de distintos aspectos del gen y de la secuencia proteíca de TcHMGB utilizando la base de datos TritrypDB y diferentes programas. Se recopiló así, información valiosa acerca de su localización genómica, los niveles de expresión durante el ciclo de vida del parásito y arquitectura de dominios conservados entre sus ortólogas. Con el uso de predictores, determinamos que la proteína TcHMGB posee sitios conservados que podrían sufrir modificaciones postraduccionales (MPTs) afectando su localización celular, de manera análoga a lo observado en su ortóloga de mamíferos (mHMGB1). Con el fin de estudiar el comportamiento de TcHMGB y mHMGB1 durante una infección in vivo, en una primera etapa, caracterizamos un modelo de infección animal con la cepa Dm28c de T. cruzi. Este modelo no resultó letal para los animales y éstos presentaron un curso de infección con parasitemias elevadas y afección cardíaca y esplénica, los cuales evolucionaron favorablemente tras superar el pico de parasitemia. Por último, estudiamos la especificidad de anticuerpos comerciales anti-mHMGB1 y se determinó que no reconocen inespecíficamente a la proteína del parásito, por lo que serán útiles en ensayos futuros para el reconocimiento de mHMGB1 en las muestras sin interferencias generadas por TcHMGB.Ítem Embargo Datos multivariados aplicados al control alimenticio(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2024) Camargo, Gonzalo; Pagani, Ariana PaulaEl consumo de jugos de arándanos ha aumentado en los últimos años debido a sus beneficios para la salud. Los arándanos son ricos en antocianinas, un pigmento natural con capacidad antioxidante, razón por la cual son muy favorables para la prevención de ciertas enfermedades. Las antocianinas son responsables del color rojo-púrpura de los jugos y un indicador de su calidad. La estabilidad de las antocianinas puede verse afectada por factores como el pH, la temperatura, la luz y la exposición al oxígeno, lo que provoca decoloración y reduce sus beneficios para la salud. La inestabilidad de los jugos de arándanos es un problema significativo que afecta la calidad del producto. También existe la posibilidad de que los jugos comerciales estén adulterados con colorantes con el fin de enmascarar la deficiencia de antocianinas. En este trabajo, se analizaron muestras de jugos comerciales de arándanos para evaluar su calidad y detectar posibles adulteraciones. Para este propósito, se emplearon señales espectrofotométricas moduladas por un gradiente de pH y se utilizaron técnicas cualitativas de quimiometría para el modelado de los datos multivariados. Los datos se procesaron mediante distintas versiones del algoritmo SIMCA (Soft independent modelling of class analogy), un método de modelado de clases que permite determinar la autenticidad de una muestra. Como resultado se obtuvo un método sencillo, económico y con muy poca generación de residuos de solventes orgánicos, capaz de verificar la legitimidad y estándares de calidad en este tipo de productos comerciales.Ítem Embargo Efectos de partículas ambientales recogidas en zonas aledañas a las industrias aceiteras como agente de toxicidad física sobre la funcionalidad de macrófagos humanos en cultivo(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025-07-03) Buccolini, Lara; Bongiovanni, Bettina; Diab, Magdalena NievesLa contaminación del aire representa un desafío ambiental y sanitario global, siendo el material particulado (PM), especialmente el PM 2,5, uno de los contaminantes más perjudiciales por su capacidad de penetrar profundamente en el sistema respiratorio e incluso alcanzar el torrente sanguíneo. El Área Metropolitana del Gran Rosario (AMGR), una región marcada por una intensa actividad agroindustrial, se han documentado concentraciones elevadas de material particulado (PM) en zonas próximas a industrias aceiteras. Esta situación podría traducirse en un riesgo sanitario relevante, tanto para la población residente como para los trabajadores que se desempeñan en dicho entorno. El presente trabajo tuvo como objetivo evaluar los efectos inmunotóxicos del material particulado ambiental recolectado en zonas aledañas a una planta aceitera sobre la funcionalidad de macrófagos humanos derivados de la línea celular THP-1 en cultivo. Para ello, se empleó un dispositivo portátil de muestreo para recolectar partículas suspendidas en el aire durante diferentes meses del año. Las muestras fueron caracterizadas e incorporadas a cultivos celulares mediante dos enfoques experimentales: en concentraciones fijas, con el fin de analizar el impacto de las propiedades fisicoquímicas del PM (tratamiento tipo I); y en volúmenes fijos, para evaluar el efecto de la cantidad de material recolectado en cada momento (tratamiento tipo II). Se llevaron a cabo estudios de viabilidad celular mediante ensayo MTT, análisis de expresión génica por qPCR de genes relacionados a inflamación [P105 (NFκB1), iκBα, iκBβ, NLRP3, CD80, iNOS e IL-1β], y cuantificación de citocinas proinflamatorias (IL-1β e IL-6) por EIA. Los hallazgos encontrados sugieren, por un lado, que el PM recolectado induce una respuesta inflamatoria temprana, mediada por la vía de señalización dependiente de NF-κB y, por otro lado, que tanto las características fisicoquímicas como el momento de su recolección podrían influir de manera diferencial en la activación de respuestas inflamatorias. Asimismo, las concentraciones de PM superaron los valores guía de la OMS, aunque permanecieron dentro de los límites legales provinciales, lo que evidencia una normativa local permisiva y desactualizada frente a los estándares internacionales. Cabe destacar que la legislación de Santa Fe aún no establece valores límite para PM2.5, a pesar de la existencia de recomendaciones internacionales al respecto. En suma, la investigación brinda evidencia científica que respalda la necesidad de un control más riguroso de la calidad del aire en zonas industriales y de medidas de protección para las poblaciones expuestas. En este marco, el AMGR, con una fuerte base agroindustrial, enfrenta un patrón de contaminación característico y el desafío urgente de avanzar hacia un desarrollo sostenible que no comprometa la salud ni el ambiente.Ítem Embargo Auditorías como herramientas de control de la inocuidad alimentaria. Elaboración de un plan de auditorías de primera parte para ser aplicado en los Comedores Universitarios de la Universidad Nacional de Rosario.(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025-06-06) Guibert, Eloisa Milagros; Bruguezi, César; D'Andrea, FlorenciaLa producción de alimentos sin las Buenas Prácticas de Manufactura (BPM) pone en riesgo la calidad de los productos elaborados y la seguridad de los consumidores. El ejemplo más claro es la posible aparición de brotes de enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs). Por lo tanto la aplicación de las BPM, como así su corrección resulta crucial. Las auditorías internas realizadas por el departamento de bromatología de los Comedores Universitarios (CU) se presentan como una estrategia para asegurar su correcta implementación, teniendo la higiene como pilar fundamental. Durante mi trabajo de auditorías se me permitió visitar y conocer en profundidad todos los establecimientos pertenecientes a la Universidad Nacional de Rosario, que se encargan no solo del expendio de productos alimenticios, sino también de su elaboración, almacenamiento, recepción y transporte. Estos no se encuentran distribuidos solo en la ciudad de Rosario, sino que también en sus alrededores. En las visitas realizadas, tuve el gusto de poner en práctica mis conocimientos adquiridos a lo largo de la carrera; los que me permitieron verificar el cumplimiento de las normativas exigidas por el departamento de bromatología de los CU, tomando como base en las exigencias establecidas en el Código Alimentario Argentino (CAA); realizar la corrección de no conformidades; y evaluar la aplicación de los Procedimientos Operativos Estandarizados para el Saneamiento (POES) implementados por parte del personal perteneciente a los comedores, que gratamente demostraron su interés y preocupación por la inocuidad de los alimentos.Ítem Embargo Evaluación de la obtención de emulsiones agua/agua (W/W) estabilizadas por gelación a partir de mezclas de micelas de caseína y goma tara para la encapsulación de compuestos bioactivos(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2023-04-13) Gispert, Gustavo; Hidalgo, María EugeniaEn los últimos años, se ha prestado más atención al desarrollo de dietas más saludables y, por lo tanto, existe una demanda de productos alimenticios con propiedades bioactivas. El desarrollo de nuevos alimentos adicionados con compuestos con propiedades bioactivas, especialmente antioxidantes, enfrenta una problemática: su inestabilidad frente a diversas condiciones de procesamiento y almacenamiento. La encapsulación en matrices biopoliméricas es una tecnología que permite su protección del medio externo, facilita su vehiculización y mejora su bioaccesibilidad y biodisponibilidad. En este trabajo de tesina se evaluaron mezclas de micelas de caseína (MC) y goma tara (GT), ambos biopolímeros alimentarios que, por combinación con procesos de separación de fases y gelificación ácida, permitieron obtener microgeles o emulsiones agua/agua (W/W) estables con capacidad para encapsular compuestos bioactivos naturales, en particular antocianinas (AC) de arándanos. Durante el trabajo de tesina se aplicaron técnicas espectroscópicas, de dispersión dinámica de la luz, microscopía, estudios reológicos y de bioactividades, entre otras. Se observó que es posible obtener microgeles estables por competencia entre el proceso de separación de fases y gelación ácida proteica de mezclas entre MC y GT en determinados rangos de concentraciones. Estas micropartículas permitirían encapsular y/o mejorar la estabilidad de las AC de arándanos y/o cualquier otro compuesto bioactivo de origen natural. De esta manera, sería posible obtener encapsulados estables que podrían ser incorporados en forma de geles y/o polvo a diversos productos alimenticios otorgando valor agregado a los mismos.Ítem Embargo Caracterización de la proteína TcHRG salvaje y las mutantes Y16G y Y127G de Trypanosoma cruzi en Saccharomyces cerevisiae(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025-05-21) Santone, Agustina Belén; Cricco, Julia AlejandraEl metabolismo del hemo es un proceso esencial en diversos organismos, incluidos parásitos como Trypanosoma cruzi, el agente etiológico de la enfermedad de Chagas. A diferencia de otros eucariotas, T. cruzi es incapaz de sintetizar hemo de novo y debe obtenerlo del hospedador. En este contexto, el grupo de investigación identificó la proteína TcHRG, cuyo rol en la captación y utilización del hemo constituye el eje central del presente estudio. Se planteó evaluar dos mutantes puntuales de TcHRG (Y16G y Y127G) en el sistema heterólogo Saccharomyces cerevisiae Δhem1, una cepa deficiente en la síntesis de ácido aminolevulínico (δ-ALA), precursor en la biosíntesis del hemo. Para ello, se diseñó una estrategia de clonado en plásmidos para la expresión de las tres versiones de la proteína (WT, Y16G, Y127G) en S. cerevisiae y se analizó el crecimiento de las células en condiciones de baja disponibilidad de hemo. Sin embargo, solo se logró evaluar TcHRG.Y16G, ya que no fue posible clonar el gen correspondiente a TcHRG.Y127G. Los resultados obtenidos indican que la mutación puntual Y16G no afecta la actividad de la proteína, y mediante análisis bioinformático se observó que la estructura global de la proteína salvaje se mantiene estable en las versiones mutantes. Por último, se clonaron ambas variantes mutantes en un plásmido de expresión para T. cruzi. Estas construcciones, obtenidas con éxito, sientan las bases para futuros estudios en el parásito.Ítem Embargo Desarrollo de metodologías sintéticas innovadoras: amplificación de la diversidad molecular y purificación simultánea(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2024-12-12) Fernández, Florencia; Delpiccolo, Carina M. L.Este Trabajo Final de Carrera consistió en realizar avances en el desarrollo de una metodología para separar mezclas de compuestos químicamente muy similares, aumentando simultáneamente la diversidad estructural de la mezcla. Para evaluar el alcance de dicha estrategia en la purificación y amplificación estructural de diferentes mezclas, se llevaron a cabo reacciones de Diels-Alder (D-A) usando el dienófilo soportado derivado de la β-alanina 4 sobre dos mezclas de carbocíclos en solución (Esquema 1). Las mezclas a separar provienen de reacciones de metátesis de eninos con cierre de anillo en condiciones reductivas. En el Esquema 1 se muestra la reacción del dienófilo soportado 4 con la mezcla de los carbociclos 2 y 3, obtenidos a partir del enino 1. Una vez transcurrida esta reacción de D-A, se genera el aducto 5, que al estar unido al soporte polimérico es filtrado, obteniendo de esta manera el ciclopentano 2 como único producto en la solución. Finalmente, el producto de cicloadición 5 fue separado de la resina por tratamiento acídico, dando la amida del aducto de Diels-Alder 6, que fue posteriormente purificado mediante una cromatografía preparativa en capa delgada. El aducto de D-A 6 fue caracterizado mediante Resonancia Magnética Nuclear (RMN) y espectrometría de masas de alta resolución (HRMS, del inglés: High Resolution Mass Spectrometry).Ítem Embargo Control de calidad en la elaboración de queso mozzarella(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025-03-07) Turdo, Martina; Giordanengo, Virginia; Rodríguez, CintiaEl control de calidad es un aspecto fundamental en la industria alimentaria, ya que garantiza el cumplimiento de la legislación vigente, contribuye a la inocuidad alimentaria e impacta directamente en la calidad y eficiencia de los procesos productivos. Este trabajo tuvo como objetivo realizar los controles de calidad durante la elaboración de queso mozzarella en la empresa Pergalac SRL. Se realizaron análisis fisicoquímicos y microbiológicos en diferentes etapas del proceso productivo, incluyendo la recepción de materias primas, etapas intermedias y en el producto final. Los resultados obtenidos demostraron que las materias primas utilizadas en el proceso (leche cruda y masa para elaborar queso mozzarella preelaborada) cumplieron con los requisitos establecidos por el Código Alimentario Argentino (CAA) y, en la mayoría de los casos, con los requisitos establecidos por la empresa. En el caso de las masas para elaborar queso mozzarella adquiridas externamente, se observaron algunos parámetros por fuera de las especificaciones establecidas por la empresa, sin embargo, estas se utilizaron igualmente ya que modificando levemente el proceso de producción se logra obtener un producto con la calidad deseada. Durante las etapas intermedias del proceso, se monitorearon parámetros claves como pH, acidez y humedad, verificando así el cumplimiento de los requisitos establecidos por el CAA y por la empresa. Finalmente, los controles del producto terminado confirmaron que el queso mozzarella obtenido presentó valores dentro de los límites aceptables y cumplió con los requisitos fisicoquímicos y microbiológicos exigidos, verificando su aptitud para su comercialización. Este trabajo evidenció la importancia de un control de calidad efectivo en la industria quesera. Además, se trató de una experiencia que permitió aplicar los conocimientos adquiridos durante la Licenciatura en Ciencia y Tecnología de los Alimentos en un entorno laboral y reafirmar el valor de las prácticas profesionales como una instancia clave para la integración de teoría y práctica en el ámbito de la industria alimentaria.Ítem Embargo Enzimas para el procesamiento de ácido hialurónico(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025-03-21) Rodríguez, Martina; Cerminati, Sebastián; Haidar, Carla NahirEl ácido hialurónico (AH) es un glucosaminoglicano lineal ampliamente distribuido en el cuerpo humano, principalmente en la matriz extracelular de las células. Debido a sus propiedades únicas, como su capacidad para retener agua y su biocompatibilidad, el AH tiene un mercado importante y diverso, que abarca industrias farmacéuticas, alimenticias, médicas y cosméticas. Sin embargo, las aplicaciones del AH en estas áreas dependen en gran medida de su peso molecular, lo que ha llevado a la demanda de AH de distintos tamaños. Existen varias estrategias biotecnológicas para obtener AH de diferentes pesos moleculares. Una de ellas es la ingeniería genética y otra consiste en utilizar hialuronidasas, enzimas capaces de escindir el AH en fragmentos más pequeños. Estas enzimas, presentes en vertebrados y bacterias, degradan el AH, lo que permite ajustar su peso molecular según las necesidades específicas de cada aplicación. En este trabajo de tesina, se abordó la segunda estrategia mencionada. Para ello, se seleccionaron genes homólogos a enzimas hialuronidasas presentes en animales y bacterias, con el objetivo de expresarlos en distintos microorganismos. Uno de estos genes se logró expresar con éxito en Escherichia coli, y posteriormente se caracterizó su actividad enzimática. Este enfoque representa un avance en la producción controlada de AH de diferentes pesos moleculares, lo que podría tener implicaciones significativas en las industrias que dependen de este versátil biopolímero.Ítem Embargo Construcción de bacterias ácido lácticas recombinantes con actividad celulasa(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2025-04-30) Terzariol, Marina; Blancato, Víctor Sebastián; Gizzi, Fernán O.: Director AsistenteEl norte Santafesino y otras regiones del país utilizan para la alimentación ganadera diferentes especies forrajeras o, alternativamente, fardos de rastrojo de sorgo y trigo, entre otros sustratos de baja calidad. Debido al crecimiento de la población mundial y al consecuente incremento del consumo de alimentos, se espera que la demanda de carne y leche se duplique en los próximos 40 años, aumentando inevitablemente el número de rumiantes en el planeta imponiéndose así un desafío a los recursos globales y a la seguridad alimentaria. En este sentido, resulta de gran interés mejorar la capacidad de aprovechamiento de pasturas de baja calidad como alimento para el ganado. En este trabajo de tesina se busca contribuir al mejoramiento de la calidad de los ensilados para ganado vacuno, evaluando nuevas estrategias biotecnológicas. En particular, se investiga la generación de una cepa de bacteria ácido láctica capaz de producir celulasas para ser utilizada en el ensilado. Se centra en la expresión y secreción de la enzima β-glucosidasa, responsable del último paso en la degradación de la celulosa. Para ello, se empleó la cepa Lactococcus lactis NZ9000 como huésped y se diseñaron dos construcciones con diferentes plásmidos para comparar su capacidad de expresión. Los vectores evaluados fueron pNZ170-usp, que emplea un sistema de expresión inducible por pH ácido y ácido láctico, compuesto naturalmente presente en la fermentación del ensilado, y pFG001, que utiliza el sistema inducible por nisina (NICE), ampliamente caracterizado y utilizado en biotecnología. Con este último plásmido, se logró la expresión de β-glucosidasa en L. lactis. Además, se evaluó la actividad enzimática a diferentes temperaturas, determinándose que la proteína es funcional y presenta mayor actividad a temperaturas elevadas.