Estudio del efecto de la tirosinación de tubulina en la estructura y dinámica del citoesqueleto en el protozoo flagelado Trypanosoma cruzi

Este trabajo de tesina se centró en el estudio de la tirosinación de α-tubulina en la estructura y dinámica del citoesqueleto del protozoo flagelado Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas. Esta modificación postraduccional de la tubulina es clave en la regulación del citoesqueleto, pero su función en tripanosomátidos sigue siendo poco comprendida. Para ello se identificaron dos secuencias homólogas a tubulin tirosin ligasas (TTL) en el genoma de T.cruzi y se realizó un análisis bioinformático de estas. Se diseñó una estrategia de edición génica con el sistema CRISPR/Cas9 para generar mutantes delecionales de los genes identificados, utilizando vectores específicos. Adicionalmente, se llevó a cabo la transfección de epimastigotes con la construcción TcBilbo1::eGFP para evaluar la colocalización de Bilbo1, una proteína del bolsillo flagelar, en estructuras del citoesqueleto del parásito. La localización de la α-tubulina tirosinada en los diferentes estadios del parásito se estudió mediante microscopía confocal e inmunofluorescencia. Además, se realizaron ensayos de extracción y análisis de proteínas del citoesqueleto mediante electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE) y Western blot. Para complementar el estudio, se implementó la técnica de microscopía de expansión con el fin de mejorar la resolución de las estructuras analizadas.