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Detección y diagnóstico de sarcopenia a través un método económico, veloz, simple y sin noxas en la consulta médica
(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2023) Gasparini, Edgardo Fabián; Marchetti, María Soledad; Carrouche, Patricio Ariel
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Implementación de sistemas de expresión de grado alimentario en Lactococcus lactis para la producción de proteínas heterólogas con aplicación agroindustrial
(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, 2026) Maggi, Franco Claudio; Blancato, Víctor Sebastián; Gizzi, Fernán O.
La producción ganadera en la provincia de Santa Fe enfrenta desafíos críticos debido a la variabilidad en la calidad de los forrajes y la necesidad de implementar prácticas de producción agrícola sostenibles. Lactococcus lactis es una bacteria ácido láctica (BAL) reconocida como segura (estatus GRAS), ampliamente utilizada como inoculante en ensilados para mejorar la conservación y el valor nutricional del alimento animal. Sin embargo, la aplicación industrial de cepas recombinantes requiere la eliminación de marcadores de resistencia a antibióticos para cumplir con las normativas de grado alimentario (food-grade en inglés). El objetivo general de este trabajo fue desarrollar los componentes de un sistema de expresión food-grade en L. lactis para la producción de enzimas con aplicación en la degradación de biomasa vegetal, utilizando una xilanasa como modelo. Para ello, se diseñó una estrategia de selección metabólica basada en la complementación del gen de la enzima alanina racemasa (alr), esencial para la síntesis de la pared celular bacteriana. Se construyó un vector quimérico termosensible, para mediar la deleción del gen alr cromosómico mediante un protocolo de doble evento de recombinación homóloga. Utilizando esta metodología, se logró obtener la cepa mutante auxótrofa L. lactis “NZ9000-alrKO” (NZ9000-Δalr), confirmada su deleción por PCR, selección fenotípica y secuenciación del locus delecionado. Posteriormente, se desarrolló un vector de expresión food-grade portador del gen de complementación alr, bajo un promotor constitutivo (P32). La funcionalidad del sistema diseñado se validó en dos instancias. Por un lado, se comprobó la eficiencia del promotor P32 para dirigir la expresión y secreción continua de la enzima reportera xilanasa. Por otro lado, la validación final del sistema de grado alimentario consistió en la exitosa restauración de la viabilidad celular de la cepa mutante en medios carentes de D-alanina tras su transformación con el vector de complementación desarrollado. Este desarrollo sienta las bases para una biotecnología local transferible al sector productivo, promoviendo una bioeconomía circular y sostenible.
El rol de proteínas adaptadoras de proteasas en la fisiología bacteriana
(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, 2026) Carnevali, Carolina Luján; Rosano, Germán L.; Petrocelli, Silvana
ClpS es la N-recognina de la vía bacteriana de la regla N-terminal y dirige proteínas portadoras de N-degrones al complejo proteolítico ClpAP. Este trabajo buscó identificar proteínas asociadas a ClpS y determinar si la disponibilidad de Mg²⁺ y la fuente de carbono modulan dichas asociaciones. Mediante LC-MS/MS cuantitativa se caracterizaron los proteomas basales de Escherichia coli cultivada bajo cuatro combinaciones de bajo o alto Mg²⁺, con glucosa o glicerol. Además, se implementó una estrategia de marcaje por proximidad in vitro basada en las fusiones ClpS(WT)-TurboID y ClpS(AA)-TurboID, esta última mutada en el bolsillo de reconocimiento de N-degrones. El análisis proteómico reveló perfiles de abundancia específicos de cada combinación. Bajo limitación de Mg²⁺, el glicerol se asoció con una mayor representación del metabolismo energético y una reducción de funciones de mantenimiento y biosíntesis, mientras que con glucosa predominaron ajustes relacionados con el ADN, la transcripción y la envoltura celular. Con Mg²⁺ suficiente, el glicerol se vinculó con el metabolismo del carbono, la biogénesis de la membrana externa y la adquisición de hierro; la glucosa, con funciones biosintéticas, homeostasis redox y mantenimiento celular, junto con una menor representación de rutas para utilizar fuentes de carbono alternativas. El análisis de presencia y ausencia identificó además un conjunto reducido de proteínas exclusivas de determinadas condiciones. Estos resultados definieron el contexto fisiológico y la referencia de abundancia para interpretar el marcaje por proximidad. Ambas proteínas quiméricas se obtuvieron en forma soluble, y la espectrometría de masas confirmó su identidad y las sustituciones esperadas en ClpS(AA). La detección de sitios adicionales de biotinilación tras agregar biotina fue compatible con la actividad de TurboID, aunque no permitió determinar su eficiencia. Los ensayos realizados con tres de las cuatro condiciones identificaron un número reducido de proteínas biotiniladas, sin diferencias reproducibles entre ClpS(WT) y ClpS(AA). Por lo tanto, no fue posible detectar asociaciones dependientes del reconocimiento de N-degrones ni establecer su modulación por el estado fisiológico. El trabajo caracteriza la remodelación proteómica de E. coli y aporta herramientas para optimizar futuros estudios de sustratos e interactores de ClpS.
Construcción de herramientas biotecnológicas para la detección de glifosato
(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, 2026) Martinez, Camila; Ottado, Jorgelina
El glifosato (GP), o N-fosfonometilglicina, es un fosfonato sintético de amplio espectro, y sus formulaciones se han convertido en los herbicidas más utilizados a nivel mundial. Este uso masivo, especialmente en regiones agrícolas como la Pampa Argentina, donde se basa la producción en cultivos transgénicos resistentes al glifosato, ha provocado la presencia generalizada de residuos de GP y de su metabolito principal, el ácido aminometilfosfónico (AMPA), en ambientes acuáticos y terrestres. Dada la preocupación sobre los riesgos para la salud asociados al uso de glifosato que fue clasificado por la Agencia Internacional para la Investigación del Cáncer (IARC, del inglés International Agency For Research on Cancer), en el Grupo 2A, posible carcinogénico para humanos, es importante y urgente desarrollar herramientas microbiológicas y moleculares accesibles y robustas para su detección y eliminación. En este contexto, el presente trabajo se enfoca en la explotación de los mecanismos de degradación del GP presentes en bacterias nativas. Previamente, se ha aislado y caracterizado la cepa ambiental Agrobacterium tumefaciens CHLDO a partir de suelos con historial de repetidas aplicaciones de herbicidas basados en glifosato (GBH, del inglés Glyphosate Based Herbicides). Esta cepa se identificó como un degradador altamente eficiente. El análisis de su genoma y los estudios transcripcionales revelaron que la capacidad de A. tumefaciens CHLDO para utilizar GP como única fuente de fósforo se basa en la vía CP liasa, codificada por el clúster génico phn. El clúster phn de A. tumefaciens CHLDO está compuesto por 15 marcos abiertos de lectura, incluyendo los genes responsables de la regulación (phnF), los transportadores (phnCDE2E1) y el núcleo activo del complejo C-P liasa (phnGHIJKLO). La expresión de estos genes se encuentra altamente inducida en presencia de GBH. Haciendo uso de este sistema de respuesta transcripcional, el objetivo principal de este proyecto fue la construcción de herramientas biotecnológicas tipo biosensores basadas en el elemento regulatorio del gen phnC, su promotor. Se propuso el clonado de las regiones promotoras de phnC y mnaT, un gen cuya expresión se induce altamente en presencia de GP, en vectores de la familia pPROBE que contienen el gen de la proteína verde fluorescente (GFP, del inglés Green Fluorescent Protein), así como la evaluación de sus características como biosensores en la cepa ambiental A. tumefaciens CHLDO. Complementariamente, y continuando con el trabajo con detectores y consumidores de GBH, se analizó la degradación por parte de la cepa Achromobacter insolitus en ensayos que replicaron las condiciones a campo, donde la bacteria fue incorporada a tierras contaminadas con GBH y se cuantificó su consumo mediante ensayos de medidas de densidad óptica y fluorescencia, utilizando un biosensor construido en el laboratorio. Los resultados de este trabajo contribuyen a aislar y caracterizar bacterias nativas con alta eficiencia de degradación de GP y han sentado las bases para la obtención de herramientas biotecnológicas robustas que pueden aplicarse a la detección y posible remoción futura de este herbicida del medio ambiente.
Modelo de aerogenerador con fines educacionales
(2024-11) López Tarallo, Nicolás Andres; Rodríguez, Guillermo; Sismondi, Pedro
El proyecto se llevó a cabo en el instituto IFAS (Braunschweig, Alemania) en el marco de la beca ALEARG. Uno de los cursos dictados por el instituto (“Tecnología de aspas de aerogeneradores”), enfrentaba la problemática de no poder plasmar los contenidos teóricos en ejemplos prácticos que complementen el dictado de la clase. Ante esta situación, se propone el objetivo de construir un modelo de un aerogenerador pequeño, sobre el cual se pueda controlar las variables de diseño. La turbina debe poder generar una cantidad mínima de potencia por hora (Watts) y el usuario debe tener la posibilidad de modificar las variables de diseño. Al poder variar las variables de diseño se puede observar su influencia en la potencia generada. Para llevar a cabo el proyecto, se realizan tareas de diseño, cálculos estáticos, programación, calibración y testeos en el canal de viento del instituto. Para llevar a cabo el proyecto, partimos de una primera versión de este realizado anteriormente por otro estudiante; la cual no funcionaba.