Caracterización de la proteína TcHRG salvaje y las mutantes Y16G y Y127G de Trypanosoma cruzi en Saccharomyces cerevisiae

El metabolismo del hemo es un proceso esencial en diversos organismos, incluidos parásitos como Trypanosoma cruzi, el agente etiológico de la enfermedad de Chagas. A diferencia de otros eucariotas, T. cruzi es incapaz de sintetizar hemo de novo y debe obtenerlo del hospedador. En este contexto, el grupo de investigación identificó la proteína TcHRG, cuyo rol en la captación y utilización del hemo constituye el eje central del presente estudio. Se planteó evaluar dos mutantes puntuales de TcHRG (Y16G y Y127G) en el sistema heterólogo Saccharomyces cerevisiae Δhem1, una cepa deficiente en la síntesis de ácido aminolevulínico (δ-ALA), precursor en la biosíntesis del hemo. Para ello, se diseñó una estrategia de clonado en plásmidos para la expresión de las tres versiones de la proteína (WT, Y16G, Y127G) en S. cerevisiae y se analizó el crecimiento de las células en condiciones de baja disponibilidad de hemo. Sin embargo, solo se logró evaluar TcHRG.Y16G, ya que no fue posible clonar el gen correspondiente a TcHRG.Y127G. Los resultados obtenidos indican que la mutación puntual Y16G no afecta la actividad de la proteína, y mediante análisis bioinformático se observó que la estructura global de la proteína salvaje se mantiene estable en las versiones mutantes. Por último, se clonaron ambas variantes mutantes en un plásmido de expresión para T. cruzi. Estas construcciones, obtenidas con éxito, sientan las bases para futuros estudios en el parásito.