FCM - Doctorado en Ciencia Biomédicas

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Examinando FCM - Doctorado en Ciencia Biomédicas por Título

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    Análisis in vitro de la disponibilidad de Griseofulvina y ketoconazol incluidos en polímeros sintéticos y semi-sintéticos. Diseño y desarrollo de sistemas poliméricos acuosos de aplicación dérmica
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2022) Marinelich, Daniela María; Calafato, Nidia Renée
    La terapéutica tópica representa una modalidad habitual de tratamiento en el campo de la Dermatología. Dentro del amplio abanico de dermatosis existentes, las micosis constituyen uno de los grupos más frecuentes, cuyo tratamiento requiere la aplicación de Ingredientes Farmacéuticos Activos (IFAs) en forma localizada, vehiculizados en una forma farmacéutica adecuada. La piel constituye una vía atractiva para la administración de IFAs, tanto en forma local como transdérmica; sin embargo, la presencia de la barrera epidérmica constituye un obstáculo para la penetración de los IFAs aplicados. La liberación de los IFAs a partir de la forma farmacéutica que los vehiculiza es un paso indispensable para conseguir el objetivo terapéutico. La hipótesis de trabajo del presente trabajo de tesis es que los polímeros de cadena flexible y anfifílicos hidrosolubles a ensayar permiten aumentar la solubilidad aparente de fármacos poco solubles en agua, proporcionando sistemas estables y mejorando la liberación de los IFAs modelo desde formas farmacéuticas semisólidas que los incluyen. Como IFAs modelo se emplearon Ketoconazol y Griseofulvina, agentes antifúngicos de baja solubilidad acuosa. Como polímeros se ensayaron derivados polisacáridos (Carboximetilcelulosa sódica, Metilcelulosa, Hidroxipropilmetilcelulosa, Quitosano, Guar Hydroxypropyl Trimonium Chloride (Cosmedia Guar®)), derivados acrílicos (Copolímero Acrilato/Palmeth-25 Iraconato (Polygel W30®), Glicerilpoliacrilato (Hyspagel 200®)), y Poloxámeros 188, 237, 338, 407. La determinación de las interacciones IFA-polímero, la capacidad de los sistemas poliméricos para la incorporación de los IFAs, la inclusión de los IFAs en las redes o micelas poliméricas y la estabilidad de los IFAs incluidos en los sistemas poliméricos se analizó por espectrofluorometría. Los resultados obtenidos en esta etapa permitieron la selección de los polímeros con los que se realizaron las etapas siguientes: Quitosano, Poliacrilatos sustituidos y Poloxamer 407. Se diseñaron sistemas gel y emulgel vehiculizando los IFAs modelo, los cuales se caracterizaron en función de su pH, signo emulsivo, extensibilidad, viscosidad aparente, comportamiento reológico y actividad antifúngica in vitro. Todos los sistemas ensayados presentaron características adecuadas para su uso por vía tópica, resultando los geles de QTO los más fluidos, adecuados para su uso como formas líquidas viscosas. La liberación in vitro de los IFAs a partir de las formas farmacéuticas fue evaluada mediante el uso de celdas de difusión verticales, seleccionando para cada IFA los parámetros de proceso adecuados (medio receptor, tipo de membrana semipermeable, velocidad de agitación). Los geles y emulgeles conteniendo Poloxámero 407, Quitosano y Copolímero Acrilato/Palmeth 25-Itaconato presentaron una mayor capacidad de liberación de Ketoconazol, comparado con una crema comercial empleada como referencia; sus perfiles de liberación se modelizaron según Korsemeyer-Peppas. Los geles y emulgeles con GRI presentaron muy bajas tasas de liberación, al igual que la crema usada como referencia (menor a 0,1%); la cinética de cesión respondió al modelo de Higuchi (difusional). Los sistemas conteniendo QTO presentaron las mayores tasas de liberación.
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    Aplicación de la solución BES-Gluconato-Polietilenglicol en la preservación de hepatocitos destinados al trasplante experimental
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2021) Tomatis, Carla; Guibert, Edgardo E.
    La terapia celular con hepatocitos es una alternativa al trasplante de órgano entero para el tratamiento de ciertas enfermedades del hígado. Una herramienta fundamental en este procedimiento es la preservación de los hepatocitos, cuya finalidad es mantener su funcionalidad desde el aislado hasta el requerimiento. En el siguiente trabajo de Tesis Doctoral se busca dilucidar el potencial de una solución desarrollada en el laboratorio denominada BGP (por sus componentes BES-Gluconato-Polietilenglicol) para la preservación hipotérmica y la criopreservación de hepatocitos aislados de rata con fines terapéuticos. A fin de validar su uso se la comparó con las soluciones comerciales Histidina-Triptófano-Cetoglucarato y de la Universidad de Wisconsin. En una primera etapa se realizaron pruebas in vitro en suspensión y en cultivo. Como prueba final se utilizó un modelo in vivo de trasplante de hepatocitos. Adicionalmente, se presentaron dos optimizaciones, una empírica y una teórica, del protocolo de criopreservación por enfriamiento lento. La solución BGP demostró una performance similar a las soluciones comerciales tanto en la preservación hipotérmica como en la criopreservación de hepatocitos aislados de rata. Los hepatocitos conservaron la viabilidad y funcionalidad en las pruebas en suspensión y en cultivo, y respondieron de manera similar al control en el modelo de trasplante experimental. En la presente Tesis se logró validar el uso de la solución BGP para la preservación de hepatocitos aislados de rata. La BGP se posiciona como una solución versátil alternativa, de fácil preparación en cualquier laboratorio, sin restricciones de acceso en cuanto a sus componentes y de menor costo que las soluciones existentes en el mercado
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    Bacteriófagos como herramientas de Intervención anti-bacteriana : aislamiento, caracterización y usos biomédicos
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2021) Boncompain, Carina Andrea; Morbidoni, Héctor Ricardo
    Staphylococcus aureus (S. aureus) tiene gran importancia como agente infeccioso tanto en humanos como en animales, provocando una serie de infecciones de distinto grado de severidad, que pueden tener implícito un riesgo a la vida. Debido al aumento de resistencia a antibióticos -especialmente a B-lactámicos- estas infecciones pueden requerir cambios de los mismos, no existiendo demasiadas opciones terapéuticas. Por ello, el uso de bacteriófagos (fagos) y enzimas codificadas por los mismos (endolisinas) como agentes antibacterianos, día a día recobra mayor interés. Durante el desarrollo de esta tesis se aislaron 148 cepas de S. aureus de dos orígenes: hisopados nasales de personal de salud del Hospital Provincial del Centenario (HPC) y del Hospital Escuela Eva Perón (HEEP) y de pacientes con psoriasis (Ps). Estas cepas fueron tipificadas feno y genotípicamente. De las muestras tomadas se aislaron 33 bacteriófagos específicos contra S. aureus, tanto directamente como por la inducción de profagos; de ellos se caracterizaron 7 en detalle. También se clonaron, y purificaron tres endolisinas (lisinas) codificadas por bacteriófagos, a dos de las cuales se les probó actividad. En conclusión, la realización de este trabajo de tesis permitió la caracterización parcial de cepas de S. aureus circulantes en el ámbito hospitalario y en pacientes con psoriasis. El aislamiento y caracterización de bacteriófagos específicos con actividad lítica contra esta bacteria es de importancia por su rol como agentes de biocontrol y además el conocimiento de los genes codificados por los mismos nos revelan su potencial rol como agentes de transferencia de genes patogénicos. Por último, la obtención de enzimas líticas con capacidad de destruir numerosas cepas de S. aureus tiene un alto interés académico y comercial.
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    Contribución del microambiente tumoral al desarrollo, crecimiento, invasión y metástasis de un adenocarcinoma de mama murino triple negativo
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2023) Del Giúdice, Antonela; Rico, María José; Rozados, Viviana Rosas
    El cáncer es una enfermedad genética y una de las principales causas de muerte en todo el mundo. El cáncer de mama triple negativo es un subtipo que se caracteriza por la ausencia de ER, PR y HER2, este tipo de tumores suelen presentarse en mujeres jóvenes, poseen un alto riesgo de recurrencia, son extremadamente malignos y metastásicos. Con el objetivo de caracterizar la respuesta inmune antitumoral y el microambiente tumoral, se desafiaron las líneas parentales CBi (susceptible), CBi- (resistente) y las F1, con el adenocarcinoma de mama M-406, triple negativo. Se evaluaron, por microscopía óptica, los tumores provenientes de los animales CBi y CBi- en forma secuencial desde el día 3 hasta que los mismos estuvieran en franco escape o eliminación. Se cuantificó previo al desafío tumoral y durante las fases de crecimiento y de escape y/o eliminación, el porcentaje de células CD4+, CD8+, Tregs y Th17 circulantes e infiltrantes de tumor y se cuantificaron las citoquinas circulantes: IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12 e IFN-γ. Con el fin de evaluar diferentes componentes del MAT determinamos el colágeno, el porcentaje de área cubierta por campo de la proteína α-SMA como marcador de miofibroblastos estromales y como marcador del proceso angiogénico determinamos las células HIF1α+. Como fue observado previamente, el tumor creció en los genotipos susceptibles, CBi y F1, y fue rechazado en CBi- y nuevamente pudimos observar que el fenotipo susceptible es dominante frente al resistente. El tumor en la línea CBi- tarda más tiempo en comenzar a crecer y lo hace a una velocidad mayor que CBi y F1, logrando duplicar su volumen tumoral en menor cantidad de tiempo, pero alcanzando menor volumen máximo tumoral. Al comparar el crecimiento tumoral en los genotipos CBi y F1, donde el tumor crece y escapa, observamos que el mismo se comportó de manera similar en ambos genotipos, aunque el tumor tarda más tiempo en comenzar a crecer en los animales F1 y luego crece más lento comparado con los animales CBi. El comportamiento del tumor en los híbridos F1, se puede explicar por el hecho que portan tanto alelos de susceptibilidad derivados de la línea parental CBi como alelos de resistencia derivados de la línea parental CBi-, lo que haría que el tumor tarde más tiempo en comenzar a crecer y cuando crezca lo haga a una velocidad menor que en los animales CBi. Al determinar las citoquinas Th1 y Th2 circulantes durante las diferentes fases de evolución de crecimiento tumoral, en las líneas parentales observamos que, en nuestro modelo, IL-4 e IFN-ɣ estarían cumpliendo un rol pro-tumoral y, por el contrario, IL-10 tendría una actividad antitumoral. Más allá de la inmunovigilancia, muchos tumores logran escapar del control del sistema inmune y continuar con su crecimiento, tal como es el caso de los animales CBi y F1. El presente trabajo nos permitió concluir que, una respuesta inmune innata temprana poco efectiva, junto con la conformación de un microambiente tumoral inmunosupresor serían, en parte, responsables del crecimiento exponencial de M-406 en esos dos genotipos. Por el contrario, el rechazo tumoral observado en la línea parental CBi-, posiblemente se deba a una interacción eficiente entre la respuesta inmune innata y adquirida. Observamos una mayor irrigación del tumor en esta línea comparando con CBi, así como también un mayor infiltrado de eosinófilos que serían capaces de eliminar de manera temprana gran parte de las células tumorales a través de su actividad citolítica. También se observó un mayor porcentaje de células CD4+ y CD8+, así como el menor porcentaje de linfocitos Tregs en el microambiente tumoral en los animales CBi- comparado con los animales CBi y F1 en la fase de crecimiento lo que explicarían, en parte, el rechazo tumoral observado en CBi-. Al evaluar la presencia de metástasis espontáneas, en los genotipos donde en tumor crece y escapa, sólo se observaron en los animales de la F1. La mayor expresión de células HiF-1α+, el mayor porcentaje de colágeno en la MEC, y el menor número de células α-SMA+ en los tumores provenientes de los híbridos F1 en comparación con aquellos provenientes de los animales CBi, sería responsable, en parte, de un fenotipo más invasivo y del desarrollo de metástasis observada en dicha línea.
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    Desarrollo de matrices poliméricas para el transporte y control de la Liberación de fármacos con actividad antifúngica
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2020) Tejada Jacob, Guillermo Iván; Leonardi, Darío; Lamas, María Celina
    La candidiasis bucofaríngea es la infección oportunista que afecta más fácilmente a pacientes con inmunodeficiencias adquiridas (VIH-Sida), y a aquellos sometidos a quimioterapia. Esta patología es tratada comúnmente por vía oral con comprimidos antifúngicos y por vía tópica empleando buches de nistatina o gel de nitrato de miconazol (NM). Formulaciones como los buches y los geles requieren varias aplicaciones diarias ya que se eliminan fácilmente por la saliva. Una alternativa al tratamiento tópico mencionado, podría basarse en matrices poliméricas de aplicación bucal, de pequeño tamaño y espesor, las cuales presentarían flexibilidad, fácil aplicación y permitirían la adhesión en el sitio de acción reduciendo el número de aplicaciones diarias y podrían llevar a un mejor cumplimiento del tratamiento por parte de los pacientes. El objetivo de este trabajo de Tesis, fue desarrollar y caracterizar matrices poliméricas basadas en combinaciones de polímeros mucoadhesivos catiónicos, aniónicos y no iónicos, cargadas con nitrato de miconazol. Las matrices poliméricas se caracterizaron en términos de propiedades mecánicas, adhesividad e hinchamiento, así como liberación de fármaco. Las diferentes formulaciones fueron investigadas mediante microscopía electrónica de barrido (MEB); las interacciones entre polímeros se analizaron mediante espectroscopía infrarroja (IR) y la estructura cristalina de los fármacos fue estudiada por difracción de rayos X (DRX). Por último, se investigó la actividad antifúngica de las formulaciones, empleando para ello cultivos de diferentes patógenos oportunistas fúngicos pertenecientes al género Candida. En una primera parte (Capítulo I) se utilizaron quitosano (Q), pectina (PC) e hidroxipropil metilcelulosa (HPMC) para formar las matrices poliméricas. Se encontró que la formulación basada en Q-HPMC resultó ser la más apropiada en términos de elongación, resistencia a la ruptura, hinchamiento y adhesividad. La evaluación de la actividad antifúngica in vitro mostró una actividad significativa del fármaco modelo cuando se cargó en matrices conteniendo Q. Estos hallazgos sugirieron que las matrices basadas en Q son un enfoque prometedor para administrar NM en el tratamiento de la candidiasis. En una segunda instancia del trabajo (Capítulo II) se utilizó Q como polímero catiónico y distintos polímeros aniónicos con diferentes densidades de carga (gelatina (GEL), goma arábiga (GA), carbopol (CB) y alginato (ALG)) para desarrollar las matrices poliméricas. Las formulaciones más apropiadas fueron las basadas en Q-GEL y Q-CB las cuales mostraron buenas propiedades mecánicas y de adhesividad, índice de hinchamiento bajo, mayor liberación del fármaco y mejor actividad in vitro contra cultivos de Candida que el NM en polvo. Por lo tanto, estas formulaciones también podrían ser consideradas como un sistema terapéutico alternativo para el tratamiento de la candidiasis oral. ...
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    Desarrollo de metodologías para el rescate de órganos de donantes a corazón parado. La perfusión hipotérmica y su posible aplicación al trasplante hepático
    (2019-03) Carnevale, Matías Emanuel; Rodriguez, Joaquín; Gondolese, Gabriel
    En la actualidad, el trasplante hepático representa la solución terapéutica predilecta en pacientes con falla hepática terminal. El constante aumento en la demanda de órganos para trasplante ha dado inicio a la expansión del criterio de selección de potenciales donantes, incluyendo a los órganos provenientes de donantes a corazón no batiente. Los mismos presentan alto riesgo de disfunción primaria como consecuencia del tiempo variable de isquemia normotérmica que atraviesan antes de la procuración. En los últimos años se ha reflotado la técnica de preservación por perfusión hipotérmica y actualmente se encuentran registros en innumerables artículos de resultados prometedores con órganos marginales. En la clínica son muy pocos los centros que la aplican para la preservación de hígados. En la presente tesis se empleó un modelo de donante a corazón parado en ratas de laboratorio, empleando la máquina de perfusión hipotérmica y una solución de preservación desarrollada en nuestro laboratorio. Este procedimiento se asoció con una mejora en la mayoría de los parámetros evaluados durante la reperfusión in vitro y en el trasplante heterotópico (resistencia intrahepática, producción biliar, consumo de O2, liberación de enzimas al perfusato, etc), cuando se compara con los resultados obtenidos en hígados preservados con una solución comercial
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    Desarrollo y evaluación de la estabilidad de principios activos y su interacción con excipientes en formulaciones farmacéuticas líquidas de uso oral para el tratamiento de cardiopatías
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2024-05) Operto, María Alejandra; Vignaduzzo, Silvana E.; Leonardi, Darío
    Introducción Los niños son frecuentemente tratados con medicamentos que nunca fueron desarrollados ni diseñados para ellos, simplemente para su tratamiento se adaptan y manipulan medicamentos usados en adultos. Por otra parte, los pacientes adultos mayores representan un grupo heterogéneo con un amplio rango de variaciones farmacocinéticas y farmacodinámicas, que pueden complicar aún más la dosificación. Todas las modificaciones realizadas con el fin de subsanar las dificultades de deglución o dosificación fraccionada pueden afectar la estabilidad física y química del principio activo, y la actividad farmacológica del medicamento a través de un aumento o disminución de la biodisponibilidad, lo que puede conducir a efectos adversos, toxicidad o disminución de la eficacia. En el presente trabajo de Tesis se plantea el desarrollo de formulaciones líquidas orales (gotas, jarabes y suspensiones) para el tratamiento de cardiopatías en pacientes pediátricos, adultos mayores y pacientes con disfagia. Las mencionadas formulaciones presentaron como ingredientes farmacéuticos activos: Carvedilol, Bisoprolol Fumarato, Amiodarona Clorhidrato y Atenolol. Resultados 1) Carvedilol. Se desarrollaron dos formulaciones líquidas, para ser administradas en forma de gotas conteniendo 3 y 5 mg mL-1 de Carvedilol. Estas formulaciones fueron almacenadas en envases de vidrio tipo III color ámbar, resultando ser fisicoquímica y microbiológicamente estables al menos durante 6 meses. Los estudios de palatabilidad realizados empleando leche como diluyente, demostraron mejorar el sabor de estas formulaciones, lo que garantizaría la adherencia al tratamiento por parte del paciente. 2) Bisoprolol Fumarato. Se desarrollaron dos formulaciones líquidas para ser administradas en forma de gotas, conteniendo 2,5 y 5 mg mL-1 de Bisoprolol Fumarato. Estas formulaciones fueron almacenadas en envases de vidrio tipo III color ámbar, resultando ser fisicoquímica y microbiológicamente estables durante al menos 18 meses. Por otro lado, se desarrollaron dos jarabes conteniendo 2,5 y 5 mg mL-1 de Bisoprolol Fumarato. Estas formulaciones fueron almacenadas en envases de vidrio tipo III color ámbar, resultando ser fisicoquímica y microbiológicamente estables durante al menos 18 meses. 3) Amiodarona Clorhidrato. Se desarrollaron dos formulaciones líquidas, gotas de Amiodarona Clorhidrato conteniendo 25 (G1) y 50 (G2) mg mL-1 del ingrediente farmacéutico activo respectivamente. La formulación G1 fue estable fisicoquímica y microbiológicamente durante al menos 3 meses, conservada en heladera. En las mismas condiciones, G2 fue estable por 30 días. También se desarrolló un jarabe conteniendo 25 mg mL-1 de Amiodarona Clorhidrato, que resultó ser estable fisicoquímica y microbiológicamente durante 30 días conservado en heladera. 4) Atenolol. Se desarrolló una bebida conteniendo 10 mg mL-1 de Atenolol. Esta formulación fue almacenada en envases de vidrio tipo III color ámbar, resultando estable fisicoquímica y microbiológicamente durante al menos 6 meses. Al no contener azúcar, esta bebida es apta para tratar pacientes diabéticos de todas las edades. Conclusiones Se han desarrollado gotas, jarabes y suspensiones para el tratamiento de cardiopatías en pacientes que presentan trastornos de la deglución de todas las edades. Las formulaciones fueron elaboradas con excipientes seguros, libres de alcohol y en dosis aprobadas para la población pediátrica y geriátrica, permitiendo, además, flexibilidad en la dosificación. Finalmente, a excepción de Amiodarona Clorhidrato, las formulaciones desarrolladas a partir de los demás ingredientes farmacéuticos activos han demostrado ser estables fisicoquímica y microbiológicamente durante al menos 6 meses.
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    Desarrollo y optimización de formas farmacéuticas líquidas de uso oral para el tratamiento de cardiopatías en pacientes pediátricos
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2022) Morri, Mauro Gaspar; Vignaduzzo, Silvana; Leonardi, Darío
    Introducción Una gran cantidad de medicamentos han sido investigados y autorizados sólo para el tratamiento de pacientes adultos, sin embargo, ante la falta de formulaciones destinadas a niños y neonatos, los mismos son adaptados y administrados a este grupo de pacientes. Para adaptar las dosis al peso corporal del paciente los medicamentos se modifican de forma rutinaria, por lo que la forma de dosificación se manipula. En estos casos, no es posible garantizar la estabilidad física, química y microbiológica de la formulación elaborada, como tampoco la uniformidad de las dosificaciones. Por tal motivo, es necesario fomentar el desarrollo de formulaciones adaptadas a las necesidades del paciente, que sean seguras, confiables y garanticen la adherencia al tratamiento. Por lo descripto anteriormente, esta Tesis propone el desarrollo y optimización de formas farmacéuticas líquidas de uso oral para el tratamiento de cardiopatías en pacientes pediátricos. Entre los ingredientes farmacéuticos activos para el tratamiento de cardiopatías se seleccionaron al atenolol, sildenafil, hidroclorotiazida, furosemida y enalapril. De todos los activos se desarrollaron gotas orales que pueden ser administradas a pacientes pediátricos. Resultados Se desarrollaron dos formulaciones conteniendo 2 mg mL-1 de atenolol. Estas formulaciones fueron almacenadas en envases de vidrio tipo III color ámbar y en envases de polietileno de media densidad, resultando estables química y microbiológicamente al menos 6 meses. Se desarrollaron seis formulaciones líquidas conteniendo 2 y 4 mg mL-1 de citrato de sildenafil. Estas formulaciones resultaron ser estables química y microbiológicamente al menos 6 meses. Los estudios de palatabilidad realizados empleando leche como diluyente, indicaron que la dilución en leche permitía mejorar el sabor de estas formulaciones, lo que garantizaría la adherencia al tratamiento. Se desarrollaron dos formulaciones líquidas conteniendo 2 mg mL-1 de hidroclorotiazida, Estas formulaciones resultaron ser estables química y microbiológicamente al menos 6 meses. Se desarrollaron formulaciones conteniendo 2, 5 y 14,7 mg de furosemida base, empleando dos procedimientos diferentes. Estas formulaciones fueron almacenadas en envases de vidrio tipo III color ámbar y en envases de polietileno de media densidad, resultando estables química y microbiológicamente al menos 6 meses. Por otro lado, se desarrolló y validó un método de espectrofotometría UV-VIS simple, rápido y sencillo para determinar el contenido de este IFA, siendo posible realizar su cuantificación sin necesidad de un tratamiento previo de la muestra. Se prepararon gotas de 2 mg mL-1 de maleato de enalapril. En una primera etapa, se evaluó la influencia del pH final de las formulaciones en la estabilidad química del maleato de enalapril. En una segunda etapa, se evaluó la influencia del tipo de agente conservante empleado para garantizar la estabilidad microbiológica de las formulaciones. Las formulaciones conservadas en heladera, empleando metil y propilparabeno, benzoato de sodio o propionato de calcio, preparadas con las soluciones buffer a todos los pH estudiados y la elaborada en agua, resultaron ser estables química y microbiológicamente al menos 6 meses. Conclusiones Se han desarrollado gotas destinadas al tratamiento de pacientes pediátricos con cardiopatías. Las gotas fueron formuladas con excipientes seguros y en dosis aprobadas para la población pediátrica. Finalmente, las formulaciones desarrolladas han demostrado ser estables química y microbiológicamente por al menos 6 meses.
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    Efecto de la osmolalidad sobre la habilidad fecundante del espermatozoide humano: un modelo de estudio in vitro
    (2012) Caille, Adriana María; Munuce, María José
    Las características funcionales del espermatozoide se modifican a medida que sobrelleva los procesos que lo preparan para adquirir su capacidad fecundante. La composición diferente de los fluidos de los tractos reproductivos masculino y femenino, le imprimirá una característica particular a cada espacio biológico. Como parte del proceso de adquisición de la capacidad fecundante, denominado “capacitación espermática”, se remueven moléculas absorbidas o integradas a la membrana plasmática, se dan cambios en la composición lipídica y aumento de la fluidez y permeabilidad de la membrana. Durante el ascenso hacia el ovocito, el espermatozoide interactúa con la superficie de las células epiteliales, los distintos productos de secreción del tracto y las cubiertas del ovocito. Estas interacciones participan en la modulación de la función espermática, en la adquisición de capacidad fecundante y en la coordinación del transporte y unión de los gametos femenino y masculino. Por otra parte, los espermatozoides pueden ser capacitados y consiguen expresar su habilidad fecundante in vitro. Una característica de los fluidos es su osmolalidad y está dada por la concentración de los componentes orgánicos e inorgánicos presentes en el mismo. Es por esto que la osmolalidad es una variable físico-química, de gran importancia en el metabolismo ntracelular, y depende tanto del tipo como de la concentración de los componentes que conforman a un fluido. Los fluidos fisiológicos, a los cuales están expuestos los espermatozoides en su tránsito hacia el sitio de la ecundación, presentan una osmolalidad variable en un rango importante (280 a 480 mOsmoles/kg). El volumen espermático estaría influenciado por el equilibrio del líquido a través de sus membranas y una falla en dicho equilibrio podría derivar en alteraciones de los mecanismos de capacitación y ecundación. Por otro lado, durante el manejo de los espermatozoides in vitro, ya sea durante las técnicas de reproducción asistida, como en los métodos utilizados para evaluar su capacidad fecundante, se utilizan medios y suplementos que pueden alterar la osmolalidad del medio en contacto con los espermatozoides. Es por todo esto que nuestro objetivo fué estudiar, la asociación entre la osmolalidad del medio al que se exponen los espermatozoides humanos y la adquisición de su capacidad fecundante, mediante un modelo de interacción in vitro.
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    Efecto del fluoruro sobre el consumo de glucosa por el sistema nervioso y sus consecuencias sobre la capacidad de aprendizaje y de memoria en ratas
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2021) Lupión, Patrici Melina; Rigalli, Alfredo; Rabelo Buzalaf, Marília Afonso
    El fluoruro se encuentra ampliamente distribuido en la corteza terrestre e ingresa al organismo principalmente a través del agua de bebida. En concentraciones mayores a 1.5 ppm produce un cuadro clínico con diferentes signos y síntomas conocidos como fluorosis. Numerosos trabajos en niños muestran disminución del cociente intelectual por consumo de agua con elevada concentración de fluoruro. En el sistema nervioso puede afectar la capacidad de aprendizaje y memoria como también el coeficiente intelectual. La energía generada debido al consumo de glucosa en este sistema podría verse alterada luego de la administración de fluoruro conduciendo a una disfunción del proceso de aprendizaje y memoria. Para comprobarlo se evaluó el efecto de la exposición de ratas Sprague-Dawley de 50 días a una dosis oral de fluoruro o a través de agua de bebida por 30 días sobre el aprendizaje y memoria espacial por medio de un laberinto de agua sin encontrar diferencias en los parámetros que evidencian estas habilidades en ambos tipos de exposiciones al fluoruro. Por otro lado, se evaluó el consumo de glucosa por el cerebro utilizando tres modelos experimentales: 1- Aplicación de un modelo matemático, 2-perfusión de cerebro in situ y, 3- consumo de 2-[C14]-desoxi-D-glucosa en cerebro. En ninguno de los tres modelos experimentales se encontró efecto del fluoruro en el consumo de la glucosa por el sistema nervioso. Tampoco tuvo efecto la forma de administración del ion. Se concluye que en la línea y edad de las ratas utilizadas el fluoruro no afecta el consumo de glucosa por el sistema nervioso ni el proceso de aprendizaje y memoria.
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    Efectos de la insulina y la glucosa sobre la homeostasis del fosfato en la diabetes experimental
    (2003) Di Loreto, Verónica Elina; Locatto, Marta Elba
    La diabetes está asociada a pérdidas urinarias de fosfato. Los objetivos generales de esta tesis fueron identificar los mecanismos afectados por la insulina y la glucosa en relación al manejo renal de fosfato en la diabetes experimental y estudiar la repercusión de las pérdidas urinarias en la homeostasis del fosfato. Como modelo se utilizó la diabetes inducida por aloxano en la rata. Se estudiaron: las variables hemodinámicas renales, función paratiroidea, efecto de la hiperglicemia y del déficit de insulina sobre el manejo renal de fosfato. Se analizó la repercusión de las pérdidas urinarias de fosfato en tejidos representativos. Nuestros hallazgos indican que en las ratas diabéticas por aloxano: La gran cantidad de glucosa excretada en orina compite con el fosfato por los mecanismos reabsortivos. La hiperfosfaturia coexiste con niveles variables de insulina y es corregida disminuyendo la sobrecarga de glucosa al túbulo renal. La hiperfosfaturia no puede atribuirse a: . Alteraciones en la filtración glomerular. Esta disminuye en las ratas diabéticas. . Niveles elevados de la hormona paratiroidea. La extirpación de la glándula paratiroidea acentúa la hiperfosfaturia. . Los tejidos blandos y el hueso. ierden fosfato en relación a la severidad de la diabetes. Los niveles plasmáticos de fosfato se mantienen dentro del rango normal debido a la disminución en la reabsorción tubular causada por la gran oferta de glucosa.
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    Estudio de casos y controles de Enfermedad Colelitiásica (EC) y su relación con la alimentación
    (2017-09-01) Bértola Compagnucci, Agustina; Pezzotto, Stella Maris
    Con el objetivo de determinar el riesgo de Enfermedad Colelitiásica (EC) en relación con los distintos factores alimentarios y con los tradicionales factores de riesgo, se llevó a cabo un estudio de casos y controles anidado a uno de prevalencia llevado a cabo en la ciudad de Rosario entre los años 1989 y 1993. Los casos son los participantes a quienes se les detectó la enfermedad en el estudio de prevalencia. Los controles fueron participantes del estudio de prevalencia a quienes se les realizó una ecografía de abdomen, para descartar la presencia de cálculos asintomáticos. A todos los participantes se les realizó una encuesta utilizando un cuestionario de frecuencia de consumo para recolectar información sobre su alimentación habitual cinco años antes del diagnóstico para los casos y habitual para los controles. Aplicando modelos lineales generales se calcularon las diferencias de consumo de los diferentes grupos de alimentos y nutrientes, a través de análisis de componentes principales se determinaron patrones de consumo y mediante análisis de regresión logística múltiple se realizaron las estimaciones de riesgos. Los casos consumieron más energía, lípidos, ácidos grasos monoinsaturados, grasas totales, pollo con piel y fiambres y embutidos que los controles. Por el contrario, la ingesta de proteínas, fibra insoluble, calcio, fósforo, vitamina A y K, otros vegetales, vegetales rojos y amarillos, vegetales totales, otras frutas, frutas frescas totales, frutas secas, pollo sin piel, lácteos descremados, lácteos totales y café fueron mayores en los controles. Al realizar los análisis de riesgo, los consumos de lípidos, carne de cerdo, carne vacuna grasa, pollo con piel, el valor calórico total y ser mujer, se comportaron como factores de riesgo. En cambio, las ingestas de vegetales rojos y amarillos, frutas secas, fósforo y el hecho de realizar cinco o más comidas al día se comportaron como factores de protección. Pudieron determinarse dos patrones de consumo, uno “Poco saludable” y otro “Saludable”. En el análisis de riesgo, el primero resultó promotor de la enfermedad y segundo, protector.
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    Estudio de factores de patogenicidad de cepas colonizantes e infectantes de Gardnerella vaginalis y su asociación con bacterias anaerobias
    (2012) Belmonte, Adriana; Suttich, Emma
    La Vaginosis Bacteriana (VB) es una patología del tracto genital inferior con mayor importancia en la etapa fértil de la mujer por el peligro de provocar Ruptura Prematura de Membrana durante la gestación y aumento de riesgo de la adquisición o propagación de infecciones por el HIV1, VHS2 y Papiloma virus. La etiología es polimicrobiana abarcando junto a Gardnerella vaginalis distintas especies de anaerobios incluyendo Micoplasmas. Ante el descubrimiento de distintos mecanismos de virulencia en Gardnerella vaginalis autores como Swidsinski y Gelber la señalan como patógeno iniciador de la VB. Los objetivos de esta tesis fueron investigar la expresión de la producción de enzimas como sialidasas y citolisinas, así como la capacidad de formar biofilm tanto en aislamientos de G. vaginalis provenientes de un grupo de pacientes con VB y en pacientes sanas, para ver si existen diferencias entre ambos grupos. Además conocer la coexistencia con Micoplasmas en cuanto a su tenor en ambas poblaciones, puesto que se trata de una patología polimicrobiana. Con esto se intenta incrementar nuestros conocimientos acerca del comportamiento de Gardnerella vaginalis, uno de los microorganismos que está señalado como principal involucrado en la patogenia de la Vaginosis Bacteriana. También nos da posibilidades de pensar estrategias para su prevención y tratamiento, e incluso implementar pruebas diagnósticas válidas, accesibles y rápidas que ayuden a hacer un diagnóstico de mayor certeza fundamentalmente en pacientes asintomáticas. En la primera etapa del estudio nos dedicamos a la inclusión de los casos y controles en base a los criterios clínicos de Amsel y microbiológicos del puntaje de Nugent, también se efectuó cultivo bacteriológico, el que nos permitió descartar otras patologías e incorporar casos de VB pura y controles sanos, asintomáticos; así como la detección de micoplasmas en ambos grupos. Al mismo tiempo se tomaron muestras de lavados vaginales (conservados a -70o C hasta el estudio posterior de producción de actividad sialidasa) y cada aislamiento de G. vaginalis se conservó a -70o C para realizar el estudio de factores de patogenicidad. En una segunda etapa se procedió a la medición de actividad sialidasa en los lavados vaginales mediante utilización de una técnica colorimétrica publicada por Cauci. En una tercera etapa se estudió la capacidad de producción de citolisina (tomando como referencia la metodología empleada por Rottini) y el estudio de la capacidad de formación de biofilm, que se llevó a cabo trabajando en microplacas de poliestireno (según la técnica descripta por Patterson). Se realizó un estudió epidemiológico de casos y controles (77 casos de VB y 77 controles) en una población original de 154 pacientes, para determinar si los factores de patogenicidad de G. vaginalis (producción de actividad sialidasa, citolisinas y formación de biofilm) y los micoplasmas implicados difieren en estos dos grupos. Se trabajó con un nivel de significación α del 5% y un poder ß del 80% y los resultados obtenidos fueron analizados estadísticamente mediante el test de U Mann Whitney para determinar si existe asociación entre las variables estudiadas. El análisis de los datos epidemiológicos se realizó calculando las razones de odds e intervalos de confianza. Las conclusiones tras la evaluación de los resultados fueron las siguientes: a) La incidencia de M. hominis y Ureaplasma spp. en la población sana fue de 1.3 y 9.1 % respectivamente, mientras que en la población con VB fue de 13 y 27.3%. Resultando el hallazgo de M. hominis estadísticamente significativo de VB (p<0.0001). b) La enzima sialidasa estuvo presente en el lavado vaginal de ambas poblaciones por lo que sugerimos un punto de corte de valores ≥ 5.5 nmoles de metoxifenol para su interpretación como índice de VB. La diferencia entre ambos grupos resultó significativa (p<0.0001) c) La capacidad de producción de citolisina no mostró diferencia significativa siendo los valores de unidades de hemólisis semejantes en ambos grupos (p=0,29). d) En lo referente a la producción de biofilm se encontró diferencia significativa entre el grupo control respecto del grupo con VB (p<0.0001) siendo de mayor magnitud en estos últimos aislamientos. Podría decirse que G. vaginalis tiene un potencial de virulencia innato y que los aislamientos provenientes de pacientes con VB tienen mayor capacidad para adherir que los de pacientes sanas. Por lo tanto al ser predominante su presencia, las enzimas que producirían como citolisina y sialidasas, actuarían sobre la mucosa favoreciendo la exfoliación y pérdida de células del epitelio vaginal. Todo esto torna más vulnerable al nicho ecológico vaginal para la adquisición de otras patologías. En cuanto al dosaje de sialidasa en fluido vaginal como método diagnóstico de VB, no es útil por si solo ya que puede haber pacientes con este síndrome con valores menores a 5,5 nmoles que es el punto de corte que proponemos.
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    Estudio de la dinámica ósea mandibular y de los procesos reabsortivos de la cresta alveolar en ratas diabéticas y controles
    (2005) Garcia, María Florencia; Puche, Rodolfo CT
    Estudio del hueso alveolar en ratas diabéticos
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    Estudio de la eficacia terapéutica de nuevas formulaciones microparticuladas de antihelmínticos en líneas del modelo murino CBi-IGE que difieren en la susceptibilidad a Trichinella spiralis
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2023-07) Codina, Ana Victoria; Hinrichsen, Lucila Isabel; Lamas, María Celina
    El albendazol y el mebendazol, antiparasitarios de amplio espectro, son los fármacos de elección para el tratamiento oral de la trichinellosis, enfermedad parasitaria causada por el helminto Trichinella spiralis. Sin embargo, ambos pertenecen a la Clase II del Sistema de Clasificación Biofarmacéutica, por tener una solubilidad acuosa extremadamente pobre que limita su absorción oral. Actualmente estos benzimidazoles se consideran efectivos cuando son administrados en la fase aguda de la trichinellosis. Ya en la cronicidad, como consecuencia de la baja solubilidad en agua, solo pequeñas cantidades de fármaco logran alcanzar las larvas encapsuladas, limitando la efectividad antiparasitaria. Por ello, se propuso como objetivo de este trabajo obtener formulaciones con mayor solubilidad, que potencien la actividad antihelmíntica de estos fármacos y actúen sobre las distintas etapas del ciclo de Trichinella spiralis. Los nuevos sistemas terapéuticos de albendazol consistieron en 20 formulaciones microcristalinas obtenidas por precipitación controlada y secado por aspersión, empleando diferentes polímeros en la estabilización. Para mebendazol se prepararon un sistema nanoparticulado (NP) por secado por atomización y un complejo de inclusión con citrato de β-ciclodextrina (Comp). La evaluación de la eficacia terapéutica de las nuevas formulaciones se hizo en ratones de ambos sexos del modelo murino de trichinellosis CBi-IGE, utilizando las líneas CBi+ y CBi/L que muestran fenotipos extremos de susceptibilidad al parásito. El efecto de las formulaciones sobre la carga parasitaria se analizó en las fases intestinal, migratoria y crónica de la enfermedad, evaluándose también los posibles efectos adversos del tratamiento. Los protocolos de tratamiento consistieron en dosis bajas de antiparasitario, administradas por períodos cortos (3 días) cuando las formulaciones actualmente en uso se dan en dosis altas y/o por períodos más prolongados. En este modelo experimental y en las condiciones en que se hicieron los experimentos, no se observaron efectos adversos debidos a la infección o los tratamientos. Los microcristales de albendazol a base de hidroxietilcelulosa (S4A) y quitosano (S10A) mejoraron significativamente la actividad antiparasitaria del ingrediente farmacéutico activo. Si bien albendazol, S4A y S10A fueron igualmente efectivos cuando se administraron en la etapa aguda de la infección, en la etapa migratoria los ratones macho tratados con S4A y S10A redujeron a la mitad la carga parasitaria muscular en comparación con los que recibieron albendazol puro. En la etapa crónica sólo los machos de la línea CBi/L tratados con S10A mostraron una eficacia terapéutica mejor que el albendazol. Asimismo, la nanopartícula y el complejo de inclusión de mebendazol desarrollados mejoraron las propiedades biofarmacéuticas del fármaco y, al ser administrados en la fase crónica de la trichinellosis, aumentaron significativamente la eficacia terapéutica en comparación con el mebendazol puro, tanto en machos como en hembras. El modelo murino de trichinellosis utilizado en esta tesis permitió examinar la compleja y dinámica relación entre hospedero – parásito – fármaco además de corroborar la influencia del genotipo y sexo sobre la respuesta farmacológica. Uno de los beneficios de un desempeño mejorado de una formulación es la posibilidad de usar dosis más bajas del ingrediente activo in vivo, que sería menos tóxico para el hospedero y permitiría tratamientos más prolongados. La mejora en las propiedades farmacocinéticas de las formulaciones desarrolladas se reflejó en una disminución significativa de la carga parasitaria muscular, en comparación con los grupos control y benzimidazol puro. Los resultados mostraron que las formulaciones serían sistemas adecuados para tratar la infección por Trichinella spiralis en la fase crónica.
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    Estudio de prevalencia de factores de riesgo cardiovasculares en la ciudad de Funes Santa Fe, Argentina
    (2017-11-17) Lamas, Carlos; Beloscar, Juan
    Objetivo: Estimar la prevalencia de factores de riesgo cardiovasculares en personas mayores de 18 años en la ciudad de Funes. Métodos:Se realizó un diseño descriptivo, transversal y observacional. De una muestra aleatoria, se reclutaron entre Setiembre 2011 y Diciembre 2014, 379 personas (173 varones y 206 mujeres) a quienes se administró cuestionario de factores de riesgo, toma de tensión arterial,medidas antropométricas, y determinaciones de glicemia y lípidos sanguíneos. Resultados: El 3,43 % de la muestra tenía enfermedad cardiovascular previa. La prevalencia de hipertensión arterial fue de 37,7 (32,9 – 42,5). La prevalencia de diabetes fue 8,4% (5,64 - 11,16). La prevalencia de hipercolesterolemia fue 35,1% (30,3 - 39,8). La prevalencia de tabaquismo fue 30,1% (25,5 - 34,7). La prevalencia de sobrepeso/obesidad fue 71,2% (66,7 - 75,7). El 48,5% (43,5 - 53,5) eran sedentarios. El 46,8% (39,4 - 54,2) de varones tuvieron perímetro de cintura mayor a 102 cm. y 49,8% (43,0 - 56,6) de mujeres mayor a 88 cm. Conclusiones: La prevalencia de factores de riesgo cardiovasculares es alta en la población mayor de 18 años de la ciudad de Funes. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas para hipertensión arterial, taba- quismo, diabetes y sedentarismo, comparados con la encuesta nacional de factores de riesgo 2013 para la región. No se pudieron comparar perímetro de cintura (no se midió en la encuesta nacional) y dislipidemias (se tomaron distintos criterios para su categorización) y la prevalencia de sobrepeso y obesidad fue más alta en la muestra, alcanzando esto último significación estadística.
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    Estudio del mecanismo de acción de monofluorofosfato de sodio sobre la remodelación ósea en ratas. Evaluación del efecto combinado con drogas anti-reabsortivas
    (2014-03-15) Brance, María Lorena; Rigalli, Alfredo
    La osteoporosis se caracteriza por pérdida de masa ósea con alteraciones en la microarquitectura ósea resultando en un aumento en el riesgo de fractura. Es conocido que el ácido zoledrónico (Z) disminuye la resorción ósea, mientras que el monofluorofosfato de sodio (MFP) aumenta la formación ósea. Se ha planteado la hipótesis que el efecto del MFP sería más efectivo sobre un hueso expuesto a alto estado de remodelación, debido a los factores de crecimiento liberados de la matriz ósea. Sobre esta hipótesis se evaluó el efecto de un tratamiento secuencial con MFP y ácido zoledrónico en ratas ovariectomizadas (OVX) con modificaciones simultáneas de la remodelación ósea empleando dietas con diferente contenido de calcio. Se utilizaron ratas Sprague Dawley de 7 semanas (n=7/grupo). Las ratas fueron ovariectomizadas, alimentadas con dieta hipocálcica por 30 días, tratadas con MFP y dieta hipercálcica por 60 días y finalmente con ácido zoledrónico y dieta hipercálcica (OVX.G3) hasta finalizar el tratamiento (150 días). Se realizaron controles: Sham: cirugía simulada, OVX: OVX sin tratamiento, OVX.G1: OVX con tratamiento secuencial con MFP y ácido zoledrónico pero con dieta normocálcica, OVX.G2: OVX con dieta hipo e hipercálcica sin tratamiento. Se realizaron mediciones bioquímicas de marcadoras de metabolismo óseo tanto plasmáticas como urinarias a 30, 90 y 150 días. Luego del sacrificio se extrajeron las tibias, en las cuales se realizó histomorfometría estática en tibia derecha y se analizó la morfometría y la densidad mineral ósea en tibia izquierda, y los fémures donde se realizaron determinaciones biomecánicas. A 30 días se halló una disminución del volumen óseo trabecular, un aumento de la fuerza de fractura cortical con disminución de la fuerza máxima trabecular en el grupo OVX alimentado con dieta normocálcica. El grupo OVX tratado con dieta hipocálcica demostró a 30 días un aumento del remodelado óseo, un incremento en el porcentaje de superficie erodada, mayor número de osteoclastos y menor fuerza de fractura trabecular. A 90 días no se hallaron diferencias en los parámetros istomorfométricos ni en las variables biomecánicas entre los diferentes grupos. A 150 días el grupo que recibió dieta hipo e hipercálcica y tratamiento con MFP y ácido zoledrónico presentó disminución del remodelado óseo, aumento de la densidad mineral ósea y aumento del volumen óseo trabecular a expensas de un aumento del número de trabéculas. Estos resultados se reflejaron en un aumento de la fuerza de fractura a la compresión y un aumento de la rigidez del hueso trabecular. A nivel cortical se observó un aumento en la fuerza de fractura. Las modificaciones en los parámetros mencionados no fueron observadas en los grupos controles. Se concluye que el tratamiento secuencial con MFP y ácido zoledrónico es más efectivo con la combinación de dietas hipo e hipercálcica que el tratamiento secuencial con MFP y ácido zoledrónico sobre un hueso sin remodelado óseo aumentado.
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    Estudios de la biodisponibilidad de calcio y evaluación sensorial de una bebida desarrollada en base a jugos de frutas, kéfir y cáscara de huevo
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2021) Chulibert, María Eugenia; Rigalli, Alfredo; Ramadán, Silvana Sandra
    La ingesta de calcio (Ca), o de alimentos lácteos en general, es menor a la recomendada en gran parte de la población por diferentes razones (acceso, preferencia, tolerancia digestiva). Se desarrolló una bebida con aporte de Ca, a la que haremos referencia a lo largo de toda la tesis como BEBIDA, a base de cáscara de huevo, frutas cítricas y kéfir, para ofrecer una fuente alternativa de Ca. La mayor concentración de Ca se obtuvo incubando a 20 ºC y durante 72 h: 6 g de cáscara de huevo, 10 g de kéfir, 200 mL de jugo de naranja y 800 mL de agua. Con estas condiciones, la BEBIDA aporta en promedio 180 mg Ca/porción. La BEBIDA también se evaluó microbiológicamente para descartar la presencia de microorganismos patógenos. Además, experimentos realizados con saco del intestino delgado evertido en ratas demostraron que la absorción intestinal de Ca de la BEBIDA fue mayor que las soluciones controles. Finalmente, a pesar de tener un valor de pH ácido, la BEBIDA no demostró tener efecto desmineralizante sobre el esmalte dental. Esta tesis aporta una metodología para preparar a nivel doméstico un producto que podría contribuir a incrementar la ingesta diaria de Ca.
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    Estudios de los potenciales mecanismos involucrados en la acción inmunomoduladora de los glucocorticoides y sus deficiencias en pacientes con tuberculosis pulmonar
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2023-07) Gallucci, Georgina Florencia; D'Attilio, luciano; Santucci, Natalia
    La Tuberculosis (TB), cuyo agente etiológico es el bacilo intracelular M. tuberculosis, afecta esencialmente al pulmón, donde puede producir desde algunas pocas lesiones hísticas hasta un cuadro de intensa inflamación con gran destrucción de parénquima. Dicha variación en el grado de afectación orgánica parece estar relacionado con la respuesta inmune celular hacia la micobacteria, habida cuenta que puede mediar tanto protección como patología. Nuestros estudios previos han indicado que los pacientes con TB se caracterizan por un desbalance inmunoendocrino, con aumento en los niveles plasmáticos de citocinas pro y antiinflamatorias y de cortisol, así como una disminución en los valores de DHEA. El incremento de mediadores inflamatorios conlleva a que la estimulación del sistema endocrino desencadene una serie de condiciones desfavorables en el intento de ejecutar un control de la respuesta inmune en curso. Al activarse el eje Hipotalámico-Pituitario-Adrenal (HPA) se induce la liberación de cortisol, el cual producirá efectos antiinflamatorios a nivel periférico, a la par que también actuará sobre el eje HPA, inhibiendo su propia síntesis. La activación excesiva del HPA podría inducir en los pacientes con TB un cambio en la permeabilidad del tracto intestinal que permite la translocación de endotoxinas al torrente sanguíneo. En esta tesis se demostró que los pacientes preferentemente con enfermedad avanzada, presentaron en circulación niveles elevados del componente principal de la membrana plasmática de bacterias Gram-negativas como lo es el lipopolisacárido). Estos hallazgos indicarían que la presencia de esta endotoxina a nivel sistémico en conjunto con la coexistencia de citoquinas inflamatorias contribuye a la inflamación crónica subyacente en la patogenia de la TB progresiva. Dado este contexto, el cortisol al ejercer su función antiinflamatoria juega un papel crucial en el control de la respuesta inmune. Es así que, una sensibilidad reducida a esta hormona podría afectar la respuesta contra la bacteria desencadenando una respuesta inflamatoria exacerbada, causando daño tisular. En pacientes con TB, además del incremento de cortisol plasmático, al estudiarse la expresión del receptor para Glucocorticoides (RG) se observó que la isoforma que media sus funciones biológicas el RGα, no modificaba sus niveles de expresión en tanto que RGβ, el cual sería un dominante negativo de la actividad del cortisol, estaba aumentada, llevando a una disminución en la relación entre ambas isoformas (RGα/RGβ). Esta disminución sugiere que las células presentan una menor capacidad de respuesta celular a los GCs endógenos. En función de esta hipótesis se llevó adelante un ensayo funcional in vitro en el cual las células de los pacientes con TB mostraron una menor sensibilidad al accionar de los GCs, lo cual se podría traducir en una disminución en la capacidad de suprimir la inflamación. Por otra parte, se estudió la expresión de diferentes genes regulados por el RG, encontrando que los pacientes con formas progresivas de TB, particularmente los casos severos, se caracterizan por una expresión aumentada de genes antiinflamatorios (ANXA1 e inhibidores de NF-κB), así como de IL-1β y de la isoforma RGβ, conjuntamente con la disminución de la capacidad proliferativa específica. Estos hallazgos indican que el cortisol modularía un cierto perfil transcripcional de acuerdo al grado de compromiso pulmonar de la TB, en un intento del todo no eficaz de reducir el proceso inflamatorio desencadenado por la respuesta celular específica ante el patógeno. Finalmente, con el objetivo de comparar la respuesta inmunoendócrina tanto en el sitio de la infección como a nivel sistémico se estudió el mismo perfil transcripcional de genes regulados por el receptor de glucocorticoides que en pacientes con tuberculosis pulmonar. Es así que, en el sitio local de la infección se encontró una disminución en la concentración de cortisol y un aumento de las citocinas inflamatorias. Estos mediadores inmuno-endocrinos podrían influir en el contexto celular al enviar diferentes señales que determinan un dado perfil transcripcional de genes regulados por el receptor de GCs. La regulación génica mediada por el RG es dependiente de su ligando por lo tanto la biodisponibilidad del cortisol en el sitio de la infección podría influir en la regulación transcripcional. Otro de los hallazgos indica que el incremento de la isoforma alfa podría ocurrir para captar las moléculas de cortisol disponibles en este sitio. En su conjunto, estos hallazgos demuestran que el desbalance inmunoendocrino, característico de los pacientes con TB severa, entraría en un círculo vicioso que retroalimentan la cronicidad de la patología. La resistencia a los GCs endógenos favorecería una regulación ineficiente de la respuesta inmune en curso, quizás necesaria en la relación a la eliminación del bacilo/daño tisular.
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    Estudios del sistema nervioso autónomo, inmunológicos y hemorrheológicos en ratas experimentalmente infectadas con Trypanosoma cruzi, sus eventuales roles patogénicos en la miocardiopatía crónica
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Médicas., 2004) Berra, Héctor H.; Revelli, Silvia S.
    La Enfermedad de Chagas, producida por el parásito Trypanosoma cruzi, constituye un serio problema sanitario que abarca principalmente a toda América Latina. La infección en el ser humano ocurre en la mayoría de los casos, por penetración del parásito en el torrente sanguíneo, vehiculizado por las heces de un insecto vector triatomino. Luego de un período agudo, en el que pocos individuos presentan signos cardíacos o extracardíacos de la enfermedad, transcurren 10 a 20 años, correspondientes al llamado período indeterminado, hasta que se manifiesta algún indicio de enfermedad crónica evidente en un 25-30 por ciento de los infectados. Los principales sistemas afectados son, el nervioso, el digestivo y el cardiovascular. En éste último, la forma típica de afección es una miocarditis crónica, la más seria a su vez, por sus complicaciones frecuentemente graves y fatales. El uso de animales de laboratorio que reproduzcan el cuadro infeccioso y las complicaciones crónicas, ha permitido eludir la dificultad del estudio patogénico de esta enfermedad en seres humanos. En nuestro laboratorio, la infección de ratas de línea "l" reproduce el cuadro agudo con parasitemias evidentes, que decrecen luego de los 15 días post-infección, cuando los títulos de anticuerpos específicos comienzan a aumentar, para mantenerse elevados a lo largo del tiempo. En este modelo, los niveles de interleuquinas, óxido nítrico y factor de necrosis tumoral alfa, también se encontraron elevados en la etapa aguda. En el período crónico, el estudio histopatológico permitió detectar la presencia de miocarditis focal en el corazón y desorganización del plexo mientérico, sin cambios en la cuenta de neuronas en el intestino delgado y el colon. La reinfección no produjo un agravamiento de estas lesiones, como tampoco diferencias en el cuadro agudo y en la evolución de la enfermedad. La frecuencia cardíaca y la presión arterial se hallaron disminuidas en la etapa aguda, mientras que un aumento cronotrópico fue el hallazgo más consistente en el período crónico. Las respuestas cardiovasculares distintas pruebas fueron anormales, sugiriendo la posibilidad de disbalance en el control autónomo. En el aparato digestivo, no se hallaron anormalidades funcionales relevantes, a pesar de la desorganización evidente del plexo mientérico intestinal. Las propiedades reológicas de la sangre, también se encontraron modificadas desde el comienzo de la infección y se evidenciaron por el aumento de las viscosidades plasmática y sanguínea. El aumento de la producción de óxido nítrico parece involucrado, directa o indirectamente, en la evolución de la enfermedad y la patogenia de las lesiones orgánicas crónicas. En síntesis, los cambios inducidos por las respuestas inflamatoria e inmune, el consecuente aumento de la producción de óxido nítrico y las alteraciones microcirculatorias, podrían constituir importantes factores implicados en la producción de la miocardiopatía chagásica crónica. Los resultados presentados sugerirían, al mismo tiempo, que los cambios inducidos por la infección y las respuestas del huésped, para controlar a aquella, generarían las condiciones causales de las lesiones descriptas. Entre ellas, la hiperviscosidad sanguínea y el incremento en la producción de óxido nítrico en el modelo en ratas "l" parecen desempeñar un papel principal. El atractivo de tales hallazgos radica, en que el tratamiento orientado a reducir a ambas, debería repercutir en menor daño crónico en los órganos blanco.