Contribución del microambiente tumoral al desarrollo, crecimiento, invasión y metástasis de un adenocarcinoma de mama murino triple negativo

El cáncer es una enfermedad genética y una de las principales causas de muerte en todo el mundo. El cáncer de mama triple negativo es un subtipo que se caracteriza por la ausencia de ER, PR y HER2, este tipo de tumores suelen presentarse en mujeres jóvenes, poseen un alto riesgo de recurrencia, son extremadamente malignos y metastásicos. Con el objetivo de caracterizar la respuesta inmune antitumoral y el microambiente tumoral, se desafiaron las líneas parentales CBi (susceptible), CBi- (resistente) y las F1, con el adenocarcinoma de mama M-406, triple negativo. Se evaluaron, por microscopía óptica, los tumores provenientes de los animales CBi y CBi- en forma secuencial desde el día 3 hasta que los mismos estuvieran en franco escape o eliminación. Se cuantificó previo al desafío tumoral y durante las fases de crecimiento y de escape y/o eliminación, el porcentaje de células CD4+, CD8+, Tregs y Th17 circulantes e infiltrantes de tumor y se cuantificaron las citoquinas circulantes: IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-12 e IFN-γ. Con el fin de evaluar diferentes componentes del MAT determinamos el colágeno, el porcentaje de área cubierta por campo de la proteína α-SMA como marcador de miofibroblastos estromales y como marcador del proceso angiogénico determinamos las células HIF1α+. Como fue observado previamente, el tumor creció en los genotipos susceptibles, CBi y F1, y fue rechazado en CBi- y nuevamente pudimos observar que el fenotipo susceptible es dominante frente al resistente. El tumor en la línea CBi- tarda más tiempo en comenzar a crecer y lo hace a una velocidad mayor que CBi y F1, logrando duplicar su volumen tumoral en menor cantidad de tiempo, pero alcanzando menor volumen máximo tumoral. Al comparar el crecimiento tumoral en los genotipos CBi y F1, donde el tumor crece y escapa, observamos que el mismo se comportó de manera similar en ambos genotipos, aunque el tumor tarda más tiempo en comenzar a crecer en los animales F1 y luego crece más lento comparado con los animales CBi. El comportamiento del tumor en los híbridos F1, se puede explicar por el hecho que portan tanto alelos de susceptibilidad derivados de la línea parental CBi como alelos de resistencia derivados de la línea parental CBi-, lo que haría que el tumor tarde más tiempo en comenzar a crecer y cuando crezca lo haga a una velocidad menor que en los animales CBi. Al determinar las citoquinas Th1 y Th2 circulantes durante las diferentes fases de evolución de crecimiento tumoral, en las líneas parentales observamos que, en nuestro modelo, IL-4 e IFN-ɣ estarían cumpliendo un rol pro-tumoral y, por el contrario, IL-10 tendría una actividad antitumoral. Más allá de la inmunovigilancia, muchos tumores logran escapar del control del sistema inmune y continuar con su crecimiento, tal como es el caso de los animales CBi y F1. El presente trabajo nos permitió concluir que, una respuesta inmune innata temprana poco efectiva, junto con la conformación de un microambiente tumoral inmunosupresor serían, en parte, responsables del crecimiento exponencial de M-406 en esos dos genotipos. Por el contrario, el rechazo tumoral observado en la línea parental CBi-, posiblemente se deba a una interacción eficiente entre la respuesta inmune innata y adquirida. Observamos una mayor irrigación del tumor en esta línea comparando con CBi, así como también un mayor infiltrado de eosinófilos que serían capaces de eliminar de manera temprana gran parte de las células tumorales a través de su actividad citolítica. También se observó un mayor porcentaje de células CD4+ y CD8+, así como el menor porcentaje de linfocitos Tregs en el microambiente tumoral en los animales CBi- comparado con los animales CBi y F1 en la fase de crecimiento lo que explicarían, en parte, el rechazo tumoral observado en CBi-. Al evaluar la presencia de metástasis espontáneas, en los genotipos donde en tumor crece y escapa, sólo se observaron en los animales de la F1. La mayor expresión de células HiF-1α+, el mayor porcentaje de colágeno en la MEC, y el menor número de células α-SMA+ en los tumores provenientes de los híbridos F1 en comparación con aquellos provenientes de los animales CBi, sería responsable, en parte, de un fenotipo más invasivo y del desarrollo de metástasis observada en dicha línea.

Tesis Doctorado Ciencias Biomédicas - Estudio Experimental en Animales