Examinando por Autor "Viale, Alejandro M."
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Ítem Acceso Abierto A cAMP/CRP-controlled mechanism for the incorporation of extracellular ADP-glucose in Escherichia coli involving NupC and NupG nucleoside transporters(Nature Research, 2018-10-19) Almagro, Goizeder; Viale, Alejandro M.; Montero, Manuel; Muñoz, Francisco José; Baroja Fernández, Edurne; Mori, Hirotada; Pozueta Romero, JavierADP-glucose is the precursor of glycogen biosynthesis in bacteria, and a compound abundant in the starchy plant organs ingested by many mammals. Here we show that the enteric species Escherichia coli is capable of scavenging exogenous ADP-glucose for use as a glycosyl donor in glycogen biosynthesis and feed the adenine nucleotide pool. To unravel the molecular mechanisms involved in this process, we screened the E. coli single-gene deletion mutants of the Keio collection for glycogen content in ADP-glucose-containing culture medium. In comparison to wild-type (WT) cells, individual ∆nupC and ∆nupG mutants lacking the cAMP/CRP responsive inner-membrane nucleoside transporters NupC and NupG displayed reduced glycogen contents and slow ADP-glucose incorporation. In concordance, ∆cya and ∆crp mutants accumulated low levels of glycogen and slowly incorporated ADP-glucose. Two-thirds of the glycogen-excess mutants identifed during screening lacked functions that underlie envelope biogenesis and integrity, including the RpoE specifc RseA anti-sigma factor. These mutants exhibited higher ADP-glucose uptake than WT cells. The incorporation of either ∆crp, ∆nupG or ∆nupC null alleles sharply reduced the ADP-glucose incorporation and glycogen content initially witnessed in ∆rseA cells. Overall, the data showed that E. coli incorporates extracellular ADP-glucose through a cAMP/ CRP-regulated process involving the NupC and NupG nucleoside transporters that is facilitated under envelope stress conditions.Ítem Acceso Abierto Acinetobacter baumannii NCIMB8209: a rare environmental strain displaying extensive insertion sequence-mediated genome remodeling resulting in the loss of exposed cell structures and defensive mechanisms(American Society for Microbiology, 2020-07-29) Repizo, Guillermo Daniel; Espariz, Martín; Seravalle, Joana L.; Díaz Miloslavich, Juan Ignacio; Steimbrüch, Bruno A.; Shuman, Howard A.; Viale, Alejandro M.Ítem Acceso Abierto Acquisition of plasmids conferring carbapenem and aminoglycoside resistance and loss of surface-exposed macromolecule structures as strategies for the adaptation of Acinetobacter baumannii CC104O/CC15P strains to the clinical setting(Microbiology Society, 2020-03-26) Cameranesi, María Marcela; Paganini, Julián; Limansky, Adriana S.; Morán Barrio, Jorgelina ; Salcedo, Suzana P.; Viale, Alejandro M.; Repizo, Guillermo DanielÍtem Acceso Abierto Chaperones moleculares : su rol en el proceso de plegamiento y ensamble intracelular de proteínas(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, 1999-04-08) Checa, Susana Karina; Viale, Alejandro M.El plegamiento de las proteínas a su conformación nativa constituye una de las bases para el correcto funcionamiento celular. La eficiencia del proceso es asegurada in vivo gracias a la participación entre otros, de sistemas especializados de proteínas denominados chaperones moleculares. Estos asistentes de plegado interaccionan no covalentemente con polipéptidos total o parcialmente desplegados favoreciendo el plegado productivo por sobre las reacciones no productivas que conducen a la agregación en condiciones fisiológicas y de estrés. Numerosas evidencias experimentales indican que distintos chaperones pueden cooperar en las células. Se ha propuesto que los sistemas de chaperones Hsp70/DnaK y Hsp60/GroE actúan secuencialmente asistiendo el plegamiento de proteínas recién sintetizadas o desnaturalizadas y el importe de éstas a organelas. Sin embargo, la transferencia secuencial parece no ocurrir en todos los casos y por ello se ha propuesto la existencia de redes flexibles y funcionales …Ítem Acceso Abierto Characterization of the diverse plasmid pool harbored by the blaNDM-1-containing Acinetobacter bereziniae HPC229 clinical strain(Public Library of Science (PLOS), 2019-11-19) Brovedan, Marco Alcides; Repizo, Guillermo Daniel; Marchiaro, Patricia M.; Viale, Alejandro M.; Limansky, Adriana S.Ítem Acceso Abierto Comparative genomic and phylogenetic analyses of gammaproteobacterial glg genes traced the origin of the Escherichia coli glycogen glgBXCAP pperon to the last common ancestor of the sister orders enterobacteriales and pasteurellales(Public Library of Science, 2015-01-21) Almagro, Goizeder; Viale, Alejandro M.; Montero, Manuel; Rahimpour, Mehdi; Muñoz, Francisco José; Baroja Fernández, Edurne; Bahaji, Abdellatif; Zúñiga, Manuel; González Candelas, Fernando; Pozueta Romero, JavierProduction of branched α-glucan, glycogen-like polymers is widely spread in the Bacteria domain. The glycogen pathway of synthesis and degradation has been fairly well characterized in the model enterobacterial species Escherichia coli (order Enterobacteriales, class Gammaproteobacteria), in which the cognate genes (branching enzyme glgB, debranching enzyme glgX, ADP-glucose pyrophosphorylase glgC, glycogen synthase glgA, and glycogen phosphorylase glgP) are clustered in a glgBXCAP operon arrangement. However, the evolutionary origin of this particular arrangement and of its constituent genes is unknown. Here, by using 265 complete gammaproteobacterial genomes we have carried out a comparative analysis of the presence, copy number and arrangement of glg genes in all lineages of the Gammaproteobacteria. These analyses revealed large variations in glg gene presence, copy number and arrangements among different gammaproteobacterial lineages. However, the glgBXCAP arrangement was remarkably conserved in all glg-possessing species of the orders Enterobacteriales and Pasteurellales (the E/P group). Subsequent phylogenetic analyses of glg genes present in the Gammaproteobacteria and in other main bacterial groups indicated that glg genes have undergone a complex evolutionary history in which horizontal gene transfer may have played an important role. These analyses also revealed that the E/P glgBXCAP genes (a) share a common evolutionary origin, (b) were vertically transmitted within the E/P group, and (c) are closely related to glg genes of some phylogenetically distant betaproteobacterial species. The overall data allowed tracing the origin of the E. coli glgBXCAP operon to the last common ancestor of the E/P group, and also to uncover a likely glgBXCAP transfer event from the E/P group to particular lineages of the Betaproteobacteria.Ítem Acceso Abierto Complete sequence of a blaNDM-1-harboring plasmid in an Acinetobacter bereziniae clinical strain isolated in Argentina(American Society for Microbiology, 2015-10) Brovedan, Marco Alcides; Marchiaro, Patricia M.; Morán Barrio, Jorgelina ; Cameranesi, María Marcela ; Cera, Gabriela; Rinaudo, Mariangel; Viale, Alejandro M.; Limansky, Adriana S.Ítem Acceso Abierto Differential role of the T6SS in Acinetobacter baumannii virulence(Public Library of Science (PLOS), 2015-09-24) Repizo, Guillermo Daniel; Gagné, Stéphanie; Foucault-Grunenwald, Marie-Laure; Borges, Vitor; Charpentier, Xavier; Limansky, Adriana S.; Gomes, João Paulo; Viale, Alejandro M.; Salcedo, Suzana P.Ítem Acceso Abierto Draft Genome Sequence of Acinetobacter bereziniae HPC229, a Carbapenem-Resistant Clinical Strain from Argentina Harboring blaNDM-1(American Society for Microbiology, 2016-04) Brovedan, Marco Alcides; Marchiaro, Patricia M.; Morán Barrio, Jorgelina; Revale, Santiago; Cameranesi, María Marcela ; Brambilla, Luciano; Viale, Alejandro M.; Limansky, Adriana S.Ítem Acceso Abierto Dynamic state of plasmid genomic architectures resulting from XerC/D-mediated site-specific recombination in Acinetobacter baumannii Rep_3 superfamily resistance plasmids carrying blaOXA-58- and TnaphA6-resistance modules(Frontiers Media, 2023-02-09) Giacone, Lucía; Cameranesi, María Marcela; Sánchez, Rocio Inés; Limansky, Adriana S.; Morán Barrio, Jorgelina ; Viale, Alejandro M.The acquisition of blaOXA genes encoding different carbapenem-hydrolyzing class-D β-lactamases (CHDL) represents a main determinant of carbapenem resistance in the nosocomial pathogen Acinetobacter baumannii. The blaOXA-58 gene, in particular, is generally embedded in similar resistance modules (RM) carried by plasmids unique to the Acinetobacter genus lacking self-transferability. The ample variations in the immediate genomic contexts in which blaOXA-58-containing RMs are inserted among these plasmids, and the almost invariable presence at their borders of nonidentical 28-bp sequences potentially recognized by the host XerC and XerD tyrosine recombinases (pXerC/D-like sites), suggested an involvement of these sites in the lateral mobilization of the gene structures they encircle. However, whether and how these pXerC/D sites participate in this process is only beginning to be understood. Here, we used a series of experimental approaches to analyze the contribution of pXerC/D-mediated site-specific recombination to the generation of structural diversity between resistance plasmids carrying pXerC/D-bounded blaOXA-58- and TnaphA6-containing RM harbored by two phylogenetically- and epidemiologicallyclosely related A. baumannii strains of our collection, Ab242 and Ab825, during adaptation to the hospital environment. Our analysis disclosed the existence of different bona fide pairs of recombinationally-active pXerC/D sites in these plasmids, some mediating reversible intramolecular inversions and others reversible plasmid fusions/resolutions. All of the identified recombinationally-active pairs shared identical GGTGTA sequences at the cr spacer separating the XerC- and XerD-binding regions. The fusion of two Ab825 plasmids mediated by a pair of recombinationally-active pXerC/D sites displaying sequence differences at the cr spacer could be inferred on the basis of sequence comparison analysis, but no evidence of reversibility could be obtained in this case. The reversible plasmid genome rearrangements mediated by recombinationally-active pairs of pXerC/D sites reported here probably represents an ancient mechanism of generating structural diversity in the Acinetobacter plasmid pool. This recursive process could facilitate a rapid adaptation of an eventual bacterial host to changing environments, and has certainly contributed to the evolution of Acinetobacter plasmids and the capture and dissemination of blaOXA-58 genes among Acinetobacter and non-Acinetobacter populations co-residing in the hospital niche.Ítem Acceso Abierto Microevolution in the major outer membrane protein OmpA of Acinetobacter baumannii(Microbiology Society, 2020-06-04) Viale, Alejandro M.; Evans, Benjamin A.Ítem Embargo Plásmidos de tipo Rep_3 en la diseminación de genes de beta-lactamasas tipo OXA y la resistencia a carbapenemes en Acinetobacter baumannii(2023) Sánchez, Rocio Inés; Viale, Alejandro M.; Morán Barrio, JorgelinaLa combinación entre el uso poco racional de antimicrobianos y la capacidad de diferentes bacterias patógenas de adquirir y acumular genes de resistencia a los mismos ha conducido a la selección de poblaciones bacterianas con fenotipos de multirresistencia (MR) en el ambiente nosocomial, y por lo tanto a una disminución acentuada de las opciones terapéuticas para el tratamiento de infecciones. Entre estos, Acinetobacter baumannii es uno de los patógenos de relevancia en infecciones asociadas con altas tasas de morbi-mortalidad. Este microorganismo Gram-negativo, aeróbico no fermentativo, causa complicaciones clínicas tales como neumonía, bacteriemia, infecciones del tracto urinario, infecciones en piel y tejidos blandos, meningitis secundaria, infecciones en heridas y quemaduras, especialmente en pacientes inmunocomprometidos. Ha demostrado una sorprendente capacidad de evolucionar MR ante el tratamiento con diversos antimicrobianos, y la rápida adquisición y diseminación de resistencia adicional a los -lactámicos carbapenemes, uno de los últimos recursos terapéuticos disponibles, constituye así un serio problema para el tratamiento de infecciones. Recientemente la Organización Mundial de la Salud (OMS) estableció una lista de patógenos MR de prioridad para el desarrollo de nuevas herramientas terapéuticas, siendo A. baumannii categorizado de prioridad crítica por su rápida capacidad de adquirir nuevas resistencias incluyendo a los carbapenemes (https://www.who.int/mediacentre/news/releases/2017/Antimicrobial_resistance_VPC_27FEB2017.pdf?ua=1). Abordar este problema en forma racional requiere un conocimiento avanzado de la fisiopatología de este organismo, incluyendo los mecanismos implicados en la adquisición y diseminación de resistencia antibiótica. Los objetivos del presente trabajo de Tesis Doctoral abarcaron el estudio de los principales mecanismos de resistencia a carbapenemes desarrollados por A. baumannii, incluyendo la contribución de reducciones en la permeabilidad de ME y la caracterización detallada de plásmidos de resistencia involucrados en la diseminación del gen de la carbapenemasa blaOXA-58 entre la población nosocomial de este patógeno, con énfasis en cepas del complejo clonal CC15 (esquema Pasteur) prevalente en nuestra región. Los resultados del primer objetivo sobre la contribución de la proteína de membrana externa (PME) CarO de A. baumannii a la resistencia a carbapenemes utilizando estudios genéticos en la cepa modelo de A. baylii ADP1 expresando las distintas variables de CarO de A. baumannii avalan la existencia de diferentes canales con selectividad diferencial hacia sustratos como aminoácidos básicos e imipenem en la ME. También nos indican que reducciones en la permeabilidad a carbapenemes por pérdidas de PME en A. baumannii pueden contribuir a, pero no son determinantes principales de, dichas resistencias. Estudios utilizando geles de poliacrilamida bidimensionales (2D) indicaron que CarO se encuentra en la ME de cepas de A. baumannii así como de recambiantes de ADP1 formando tanto complejos homo-oligoméricos como hetero-oligoméricos con OmpA, la proteína mayoritaria de la ME. Ello apoya la hipótesis de que estos oligómeros podrían generar canales acuosos de mayor diámetro que facilitarían el ingreso de aminoácidos básicos o de carbapenemes a través de esta barrera de permeabilidad. Los resultados del segundo objetivo sobre la caracterización de plásmidos de resistencia a carbapenemes presentes en cepas clínicas locales de A. baumannii perteneciente al CC15 contribuyen a comprender la capacidad de las mismas de diseminar el gen de la carbapenemasa OXA-58 (blaOXA-58) en el ambiente nosocomial. Dichos plásmidos se encuentran en un estado dinámico de formación y resolución de co-integrados mediado por eventos de recombinación sitio-específica empleando sitios reconocidos por recombinasas XerC/D. Ello conduce a la generación de diferentes multi-replicones portando módulos de adaptabilidad conteniendo al gen blaOXA-58, lo cual contribuye a su movilización y diseminación en la población bacteriana mediante transferencia horizontal de genes. La presencia de diferentes módulos de replicación en una misma molécula de plásmido confiere evidentes ventajas para la diseminación y persistencia del co-integrado durante el tránsito por múltiples hospedadores, pero genera interrogantes sobre si todos estos replicones son efectivamente activos o sobre posibles conflictos que conduzcan a la pérdida del mismo o del módulo de adaptabilidad que esta porta. Encontramos que los 4 diferentes módulos replicativos que componen estos multi-replicones se mostraron activos al ser clonados en forma individual en diversos hospedadores del género Acinetobacter, incluyendo cepas nosocomiales y ambientales. Ello indica para los mismos un amplio rango de hospedador frente a eventos de transferencia horizontal, permitiendo así la rápida diseminación de la resistencia dentro de especies del género coexistiendo en el ambiente nosocomial. La caracterización detallada de la secuencia de los distintos módulos replicativos, sumada a ensayos funcionales, indicaron que todos ellos responden al modelo de iterones con regulación negativa del número de copias y donde cada uno posee un gen distintivo para una proteína de inicio de la replicación RepAci de la superfamilia Rep_3. El número de copias por célula de los módulos de replicación clonados en forma individual, medido en hospedadores modelo del género Acinetobacter, varió entre 5 a 8 ubicándolos en el espectro moderado. En uno de ellos identificamos regiones repetitivas independientes de los iterones las cuales se mostraron como reguladores negativos de su replicación, con potencial impacto en la resistencia antibiótica. Demostramos, asimismo, y por vez primera, que replicones Rep_3 de plásmidos de A. baumannii presentan incompatibilidad funcional, desarrollando una metodología a tal efecto. Nuestros resultados indicaron además que las clasificaciones basadas en identidades de secuencia de proteínas RepAci no son buenas predictoras de incompatibilidad funcional, y por ende de la posible coexistencia de diferentes replicones en una misma célula. En síntesis, esta tesis contribuye a definir algunos de los factores involucrados en la evolución y diseminación de resistencia a carbapenemes mediada por plásmidos en la población nosocomial de especies del género Acinetobacter, y pueden contribuir al diseño racional de medidas y herramientas farmacológicas para el control de infecciones debidas a patógenos oportunistas multirresistentes en el ámbito hospitalario.Ítem Acceso Abierto Pseudomonas putida group species as reservoirs of mobilizable Tn402-like class 1 integrons carrying blaVIM-2 metallo-β-lactamase genes(Elsevier B.V., 2021-11-06) Brovedan, Marco Alcides; Marchiaro, Patricia M.; Díaz, María S.; Faccone, Diego; Corso, Alejandra; Pasteran, Fernando; Viale, Alejandro M.; Limansky, Adriana S.Ítem Acceso Abierto Site-specific recombination at XerC/D sites mediates the formation and resolution of plasmid co-integrates carrying a blaOXA-58- and TnaphA6-resistance module in Acinetobacter baumannii(Frontiers Media, 2018-01-26) Cameranesi, María Marcela ; Morán Barrio, Jorgelina; Limansky, Adriana S.; Repizo, Guillermo Daniel; Viale, Alejandro M.Ítem Acceso Abierto Staring at the cold sun: blue light regulation is distributed within the genus acinetobacter(Public Library of Science (PLOS), 2013-01-24) Golic, Adrián Ezequiel; Vaneechoutte, Mario; Nemec, Alexandr; Viale, Alejandro M.; Actis, Luis A.; Mussi, María AlejandraWe previously showed that the opportunistic nosocomial pathogen Acinetobacter baumannii is able to sense and respond to light via BlsA, a BLUF (Blue-Light-sensing Using FAD)-domain photoreceptor protein. Here, we extend our previous studies showing that light regulation is not restricted to A. baumannii, but rather widespread within the genus Acinetobacter. First, we found that blue light modulates motility and biofilm formation in many species of the genus, including members of the Acinetobacter calcoaceticus-A. baumannii complex. In many of these species blue light acts as a key factor guiding the decision between motility or sessility at 24°C, whereas in A. baumannii, light inhibits both motility and biofilm formation. We also show that light regulation of motility occurred not only at 24°C but also at 37°C in non-A. baumannii species, contrasting the situation of A. baumannii which only shows photoregulation at 24°C. Second, we show that Acinetobacter baylyi (strain ADP1) BLUF-photoreceptors can functionally replace in vivo the A. baumannii 17978 BlsA protein and that the pathways leading to biofilm formation are inversely regulated at 24°C between these two microorganisms. Finally, we found the presence of predicted genes coding BLUF-containing proteins in all Acinetobacter sequenced genomes, even though the copy number is variable among them. Phylogenetic analysis suggests a common origin for all BLUF domains present in members of this genus, and could distinguish well-differentiated clusters that group together BLUF homologs from different species, a situation particularly clear for members of the ACB complex. Despite a role played by these BLUF domain-containing proteins in the photoregulation observed in the members of the genus Acinetobacter is a likely scenario given our findings in A. baumannii and A. baylyi, further research will contribute to confirm this possibility.Ítem Acceso Abierto Systematic production of inactivating and non-inactivating suppressor mutations at the relA locus that compensate the detrimental effects of complete spoT loss and affect glycogen content in Escherichia coli(Public Library of Science, 2014-09-04) Montero, Manuel; Rahimpour, Mehdi; Viale, Alejandro M.; Almagro, Goizeder; Eydallin, Gustavo; Sevilla, Ángel; Cánovas, Manuel; Bernal, Cristina; Muñoz, Francisco José; Baroja Fernández, Edurne; Bahaji, Abdellatif; Mori, Hirotada; Codoñer, Francisco M.; Pozueta Romero, JavierIn Escherichia coli, ppGpp is a major determinant of growth and glycogen accumulation. Levels of this signaling nucleotide are controlled by the balanced activities of the ppGpp RelA synthetase and the dual-function hydrolase/synthetase SpoT. Here we report the construction of spoT null (DspoT) mutants obtained by transducing a DspoT allele from DrelADspoT double mutants into relA+ cells. Iodine staining of randomly selected transductants cultured on a rich complex médium revealed differences in glycogen content among them. Sequence and biochemical analyses of 8 DspoT clones displaying glycogen-deficient phenotypes revealed different inactivating mutations in relA and no detectable ppGpp when cells were cultured on a rich complex medium. Remarkably, although the co-existence of DspoT with relA proficient alleles has generally been considered synthetically lethal, we found that 11 DspoT clones displaying high glycogen phenotypes possessed relA mutant alleles with non-inactivating mutations that encoded stable RelA proteins and ppGpp contents reaching 45–85% of those of wild type cells. None of the DspoT clones, however, could grow on M9-glucose minimal medium. Both Sanger sequencing of specific genes and high-throughput genome sequencing of the DspoT clones revealed that suppressor mutations were restricted to the relA locus. The overall results (a) defined in around 4 nmoles ppGpp/g dry weight the threshold cellular levels that suffice to trigger net glycogen accumulation, (b) showed that mutations in relA, but not necessarily inactivating mutations, can be selected to compensate total SpoT function(s) loss, and (c) provided useful tools for studies of the in vivo regulation of E. coli RelA ppGpp synthetase.Ítem Acceso Abierto The environmental Acinetobacter baumannii isolate DSM30011 reveals clues into the preantibiotic era genome diversity, virulence potential, and niche range of a predominant nosocomial pathogen(Oxford University Press, 2017-08-26) Repizo, Guillermo Daniel; Viale, Alejandro M.; Borges, Vítor; Cameranesi, María Marcela; Taib, Najwa; Espariz, Martín; Brochier-Armanet, Céline; Gomes, João Paulo; Salcedo, Suzana P.Ítem Acceso Abierto Virulence role of the outer membrane protein CarO in carbapenem-resistant Acinetobacter baumannii(Taylor & Francis, 2020-12-10) Labrador-Herrera, Gema; Pérez-Pulido, Antonio J.; Álvarez-Marína, Rocío; Casimiro-Soriguer, Carlos S.; Cebrero-Cangueiro, Tania; Morán Barrio, Jorgelina ; Pachón, Jerónimo; Viale, Alejandro M.; Pachón-Ibáñez, María Eugenia