Examinando por Autor "Cavatorta, Ana Laura"
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Ítem Acceso Abierto Cost-effective method to perform SARS-CoV-2 variant surveillance: detection of Alpha, Gamma, Lambda, Delta, Epsilon, and Zeta in Argentina(Frontiers Media, 2021-12-10) Proyecto Argentino Interinstitucional de genómica de SARS-CoV-2; Posner, Victoria María; Villanova, Gabriela Vanina; Acosta, Julián; Cavatorta, Ana LauraÍtem Acceso Abierto Disc Large 1 expression is altered by Human Papillomavirus E7/E6 proteins in organotypic cultures of human keratinocytes(Microbiology Society, 2016-02) Bugnon Valdano, Marina Paula; Cavatorta, Ana Laura; Morale, Miriam; Marziali, Federico Emanuel; Steenbergen, Renske; Boccardo, Enrique; Gardiol, DanielaÍtem Acceso Abierto DLG1 polarity protein expression associates with the disease progress of low-grade cervical intraepithelial lesions(Elsevier) Cavatorta, Ana Laura; Di Gregorio, Alejandra; Bugnon Valdano, Marina Paula; Marziali, Federico Emanuel; Cabral, Mariela; Bottai, Hebe; Cittadini, Jorge; Nocito, Ana Lía; Gardiol, DanielaÍtem Embargo Estudio de la contribución de factores celulares y virales en los procesos tumorales asociados a infecciones por virus oncogénicos(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2016-03-28) Bugnon Valdano, Marina Paula; Gardiol, Daniela; Cavatorta, Ana LauraEn el presente trabajo de Tesis se profundizó el entendimiento de mecanismos involucrados en la regulación de proteínas de polaridad, con especial interés en la alteración de la expresión de dichas proteínas celulares en los procesos de transformación maligna. Particularmente, se analizó la regulación de la expresión de la proteína DLG1, cuya expresión se ve alterada en variedad de tumores y que ha sido propuesta como una proteína clave en el mantenimiento de la polaridad celular a nivel de las uniones adherentes. Inicialmente, se estudió la incumbencia en la regulación de DLG1 durante procesos vinculados a infecciones por HPV. Se optimizaron y desarrollaron, por primera vez en nuestro medio, cultivos organotípicos tipo raft. Se generaron dichos cultivos expresando las proteínas transformantes de HPV-18, lo que permitió analizar la regulación de DLG1 en un contexto mimetizando el ambiente natural de infección viral. Mediante esta estrategia de estudio se pudieron analizar en detalle los efectos de la presencia de las mencionadas proteínas virales en la expresión de DLG1. Así, se demostró que la presencia de las oncoproteínas virales provoca alteraciones en la distribución subcelular de DLG1 en el ambiente epitelial y, a su vez, genera cambios significativos en sus niveles. También se analizó el efecto de proteínas virales del HPV- 11, de bajo riesgo oncogénico, observándose cambios significativos tanto en los niveles como en la distribución de DLG1. Por lo tanto, se profundizó en el entendimiento de los mecanismos subyacentes a infecciones por HPV, tanto asociadas como no a procesos carcinogénicos. Una diferencia importante observada entre ambos tipos viales fue la ausencia de DLG1 en los contactos celulares para HPV-18, efecto no evidenciado en el caso del HPV-11. Estas diferencias entre HPV de alto y bajo riesgo podrían tener relevancia en las patologías asociadas, dado los reportes sobre la función oncosupresora de DLG1 a nivel de los contactos celulares. Además, se analizó y discutió la incumbencia de distintos mecanismos potencialmente involucrados en los cambios de la expresión de DLG1, estudiando en especial detalle la participación de alteraciones en el ciclo celular por parte de HPV. Por otro lado, se investigó la expresión de otra proteína de polaridad, PAR3, y su alteración en presencia de las proteínas virales. PAR3 es crucial para la formación de las uniones tight y en los últimos años se ha incrementado el conocimiento de sus funciones como supresor de tumores. Notablemente, mediante cultivos organotípicos se observaron cambios importantes en los niveles totales de PAR3 en presencia de proteínas de HPV tanto de alto como de bajo riesgo oncogénico, indicando probables mecanismos comunes sobre la expresión de la mencionada proteína celular durante las infecciones virales. Además, se obtuvieron resultados preliminares en el estudio de la expresión de PAR3 en biopsias cervicales, paso importante en la identificación futura de probables biomarcadores. También, se estudió la expresión génica de HPV en los cultivos raft portando las secuencias que codifican para las proteínas E6 y E7 de HPV-18. Una premisa fundamental para conocer como el virus interfiere con los blancos celulares es analizar la expresión de los genes tempranos de HPV, en especial de las distintas isoformas de E6. Así, a partir de técnicas moleculares específicas optimizadas, se demostró una mayor expresión de la isoforma E6* en las capas Inferiores del epitelio. Además, se encontró a lo largo del tejido epitelial una transcripción diferencial de DLG1, en relación directa a los niveles de transcriptos virales. Estos datos constituyen un avance en el entendimiento de los cambios en la abundancia de DLG1 en presencia de HPV. Dado que cambios en los patrones de la expresión de DLG1 se observan también en tumores no asociados a HPV, se analizó la incumbencia de factores independientes de tales infecciones. Se investigó la injerencia de mecanismos epigenéticos y, en particular, del estado de metilación de su promotor. Así, se establecieron las bases para el análisis de dichos mecanismos en la regulación de DLG1, no estudiado hasta el momento. Estos ensayos no mostraron una relación directa entre la regulación de los niveles de DLG1 y los mecanismos epigenéticos propuestos, tanto en una variedad de células como en tumores asociados a HPV. No obstante, en base a los resultados obtenidos, dichos mecanismos podrían tener un rol interesante en la regulación de DLG1 en otros tipos tumorales, particularmente durante la progresión maligna en colon. Por lo tanto, en total los resultados del presente trabajo indican mecanismos de alteración de proteínas de polaridad por parte de las proteínas de HPV que podrían ser de gran importancia durante las infecciones naturales. Algunas diferencias fundamentales observadas entre HPV de alto y bajo riesgo podrían resultar relevantes al relacionarse con las patologías asociadas a cada tipo viral. Conjuntamente, los datos presentados constituyen un paso fundamental para comprender la biología del cáncer en general, considerando que la disrupción de la polaridad celular es un evento clave de los procesos tumorales. Por último, la extrapolación a la clínica de los conocimientos generados desde estudios de patobiología básica, como el presente trabajo, es fundamental para la identificación de biomarcadores que contribuyan al diagnóstico y al tratamiento en enfermedades oncológicas.Ítem Acceso Abierto HPV E6 and E7 oncoproteins cooperatively alter the expression of Disc Large 1 polarity protein in epithelial cells(BMC, 2020-04-07) Dizanzo, María Paula; Marziali, Federico Emanuel; Brunet Avalos, Clarise; Bugnon Valdano, Marina Paula; Leiva, Santiago Gabriel; Cavatorta, Ana Laura; Gardiol, DanielaBackground: Persistent infection with high-risk Human Papillomavirus (HPVs) is associated with the development of cervical cancer. The transforming capacity of these viruses relies on the cooperative action of the E6 and E7 viral oncoproteins. Among the oncogenic activities of E6, the interaction and interference with cell polarity PDZ proteins have been well established. One of the most characterized PDZ targets of HPV E6 is human Disc large 1 (DLG1), a scaffolding protein involved in the control of cell polarity and proliferation. Interestingly, in cervical squamous intraepithelial lesions, alterations in DLG1 expression were observed in association to tumour progression. Moreover, the expression of both HPV E6 and E7 proteins may be responsible for the changes in DLG1 abundance and cell localization observed in the HPV-associated lesions. Methods: Due to the relevance of DLG1 deregulation in tumour development, we have performed an in-depth investigation of the expression of DLG1 in the presence of the HPV oncoproteins in epithelial cultured cells. The effects of HPV E6 and E7 proteins on DLG1 abundance and subcellular localization were assessed by western blot and confocal fluorescence microscopy, respectively. Results: We demonstrated that the relative abundance of HPV-18 E6 and DLG1 is a key factor that contributes to defining the expression abundance of both proteins. We also show here that a high expression level of DLG1 may negatively affect HPV-18 E6 nuclear expression. Moreover, the co-expression of HPV-18 E6 and E7 produces a striking effect on DLG1 subcellular localization and a co-distribution in the cytoplasmic region. Interestingly, HPV-18 E7 is also able to increase DLG1 levels, likely by rescuing it from the E6-mediated proteasomal degradation. Conclusions: In general, the data suggest that HPV-18 E6 and E7 may have opposing activities in regards to the regulation of DLG1 levels and may cooperatively contribute to its subcellular redistribution in the HPV context. These findings constitute a step forward in understanding the differential expression of DLG1 during tumour progression in an HPV-associated model.Ítem Acceso Abierto Human papillomavirus (HPV)-18 E6 oncoprotein interferes with the epithelial cell polarity Par3 protein(Federation of European Biochemical Societies, 2014-01-14) Facciuto, Florencia Natalia; Bugnon Valdano, Marina Paula; Marziali, Federico Emanuel; Massimi, Paola; Banks, Lawrence; Cavatorta, Ana Laura; Gardiol, DanielaÍtem Acceso Abierto Interference of HTLV-1 Tax Protein with Cell Polarity Regulators: Defining the Subcellular Localization of the Tax-DLG1 Interaction(MDPI, 2017-11-23) Marziali, Federico Emanuel; Bugnon Valdano, Marina Paula; Brunet Avalos, Clarise; Moriena, Lucía; Cavatorta, Ana Laura; Gardiol, DanielaÍtem Acceso Abierto Longitudinal follow-up of the immunity to SARS-CoV-2 in health care workers in Argentina: Persistence of humoral response and neutralizing capacity after Sputnik V vaccination(NLM (Medline), 2023-06-22) Castro, Eliana F.; Acosta, Julián; Moriena, Lucía; Rios Medrano, Mayra; Tejerina Cibello, Malena; Codino, Eduardo; Taborda, Miguel Ángel; Álvarez, Diego E.; Cavatorta, Ana LauraÍtem Embargo Mecanismos conservados de patogénesis viral: Alteración de la polaridad celular y de las uniones intercelulares(2022) Dizanzo, María Paula; Gardiol, Daniela; Cavatorta, Ana LauraLos procesos celulares básicos, como el crecimiento y división celular, son guiados por una asimetría especial que adoptan lípidos y proteínas dentro de la célula. Esta disposición de componentes celulares se conoce como polaridad celular y las proteínas de polaridad son las encargadas de su regulación. Durante años se ha estudiado la relación entre alteraciones en la expresión de estas proteínas con el desarrollo oncogénico. A su vez, también, se conoce que diferentes tipos de virus humanos, oncogénicos y no oncogénicos, son capaces de interferir y alterar la expresión de estas proteínas como parte de su mecanismo de patogénesis. Entre aquellos virus oncogénicos se encuentran los Virus de Papiloma Humano (HPV, por sus siglas en inglés Human Papilloma Virus) tipo 16 (HPV-16) y 18 (HPV-18), ya que su infección está altamente asociada al desarrollo de cáncer cervical, y se los ha vinculado también a la progresión de otros tipos de tumores. La actividad transformante de estos virus se asienta principalmente en la acción conjunta de dos de sus proteínas, E6 y E7. La oncoproteína E6 es capaz de unirse a los dominios de interacción proteica denominados PDZ (su nombre deriva de: PSD-95 (del inglés, Postsynaptic density protein 95), DLG1 (del inglés, Disc Large 1) y ZO-1 (del inglés, Zonula Occludens 1)). Muchas proteínas de polaridad poseen en sus secuencias dominios PDZ y se ha demostrado que las mismas presentan alteraciones en su localización y en los niveles de su expresión relacionándose con el desarrollo de patologías. La relación de E6 de HPV con la proteína de polaridad DLG1 ha sido muy estudiada y se propuso como el principal blanco de HPV-18. DLG1 se encuentra involucrada en la organización de uniones intercelulares adherentes que contribuyen a la polarización celular. En primera instancia, se observó que la sobre-expresión de E6 estimula la degradación de DLG1 por un mecanismo dependiente de proteasomas. Por otro lado, para poder analizar la relación de esta proteína de polaridad con el desarrollo de la carcinogénesis mediada por HPV, en nuestro laboratorio se analizó la expresión de DLG1 por inmunohistoquimica en muestras histológicas de pacientes con lesiones cervicales asociadas a HPV oncogénico. En estos experimentos se demostró que, en lesiones precursoras al carcinoma invasivo, los niveles de DLG1 se encuentran incrementados en comparación al epitelio estratificado de la mucosa normal y al mismo tiempo que su localización tisular y celular está alterada. En este caso, la expresión de DLG1 se observó disminuida en los bordes celulares donde normalmente se localiza, con una clara redistribución hacia el citoplasma. Subsecuentemente, con el fin de analizar en más detalle los mecanismos involucrados en estas observaciones, se emplearon cultivos organotípicos raft de queratinocitos humanos (que permiten reproducir in vitro epitelios escamosos) expresando E6 y E7 de HPV de alto riesgo oncogénico, y de este modo se analizó el efecto de las proteínas virales sobre DLG1. Así, se pudo demostrar que la deslocalización e incremento de los niveles de DLG1, observados previamente en biopsias de pacientes, son producto de la expresión de estas oncoproteínas virales. Interesantemente, otros estudios han brindado evidencia de que la proteína DLG1 presenta cambios en su distribución y abundancia celular en varios tumores, lo cual sugiere que funciona como supresor tumoral. Sin embargo, en ciertos contextos biológicos podría favorecer el desarrollo oncogénico, especialmente cuando está deslocalizada. A partir de estas observaciones podemos notar que la relación de DLG1 con proteínas virales es compleja y, por lo tanto, se requiere ahondar aún más en su análisis. Por esta razón, parte de este trabajo de Tesis se enfocó en profundizar los estudios sobre la relación HPV-DLG1 que nos permitan comprender mejor el rol de esta proteína de polaridad en el desarrollo de la carcinogénesis. En línea con lo expuesto, en este trabajo de Tesis, generamos un modelo celular epitelial que nos permitió mimetizar el escenario de las alteraciones sufridas por DLG1 observadas en biopsias de pacientes con lesiones ligadas a infección con HPV, y así, pudimos profundizar el estudio de los posibles mecanismos involucrados. Pudimos determinar que la co-expresión de DLG1 y E6 de HPV18 (E618) provoca alteraciones en la localización subcelular de ambas proteínas de manera dependiente del motivo de unión a PDZ presente en E618. Además, estos estudios nos permitieron determinar que la expresión conjunta de las oncoproteínas E618 y E718 (E7 de HPV18) promueve la re-distribución subcelular de DLG1 y que E718 no tiene una interacción directa con DLG1 en este contexto. Analizando los niveles de expresión de DLG1 pudimos determinar que E718 ejerce un efecto estabilizador sobre esta proteína de polaridad, aún en presencia de E618 en condiciones de degradación. Más aún, demostramos que la actividad de E718 sobre DLG1, tanto de estabilización como de deslocalización, se encuentra especialmente ligada a la fosforilación de la proteína viral en el sitio de reconocimiento para la quinasa CKII (del inglés, Casein Kinase II) presente en su secuencia. Esto resulta de mucho interés dado que E7 es capaz de interaccionar con numerosos blancos celulares y su fosforilación puede favorecer estas interacciones, por lo tanto, es probable que la fosforilación por CKII regule las principales funciones de E7 requeridas para la estabilización y re-localización de DLG1. Aún más, a partir de análisis llevados a cabo como parte de esta Tesis, demostramos que E718 también es capaz de regular la abundancia de otra proteína de polaridad clave como hScrib, el principal blanco de HPV-16. Por lo tanto, procedimos a investigar el efecto de E616 y E716 sobre la expresión de dicha proteína celular con el fin de analizar un posible mecanismo de patogénesis conservado entre distintos tipos de HPV de alto riesgo oncogénico. En este sentido, pudimos concluir que la actividad de E7 está conservada en otros tipos de HPV de alto riesgo en relación a la estabilización de proteínas de polaridad. Estos resultados, en conjunto, contribuyen al entendimiento molecular de la alteración de la polaridad celular durante la oncogénesis mediada por los oncovirus HPV. Por otro lado, como se mencionó anteriormente, existen virus no oncogénicos que también son capaces de interferir con la función y expresión de proteínas celulares de polaridad. En este sentido, iniciamos estudios con el virus Zika (ZIKV) como un modelo de virus no oncogénico. El ZIKV es transmitido por mosquitos del género Aedes perteneciente al género flavivirus. Además, existen evidencias de su trasmisión sexual y vertical. Entre los signos y síntomas comunes en personas infectadas se encuentran cuadros de fiebre, letargo, conjuntivitis, sarpullidos y artralgias. Sin embargo, en la última década el ZIKV ha sido relacionado con el desarrollo de enfermedades severas como el Síndrome de Guillain Barré y microcefalia congénita. En Argentina se han confirmado casos autóctonos e importados y en los últimos años ha adquirido creciente relevancia epidemiológica. Con el fin de extender los ensayos sobre el efecto de la infección de este flavivirus en la polaridad celular epitelial, se desarrolló la puesta a punto de la metodología de infección en la línea epitelial A549 a través de una colaboración con el Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas “Dr. J. Maiztegui”. Luego, como parte de este trabajo de Tesis, se optimizaron las condiciones experimentales para el análisis de la expresión de DLG1 como marcador de polaridad celular en el modelo epitelial tras la infección con aislamientos regionales de ZIKV. Esto permitió sentar las bases para futuros estudios en nuestro laboratorio en relacioón a virus no oncogénicos y la disrupción de la polaridad celular. En resumen, teniendo en cuenta los datos alcanzados, este trabajo de Tesis Doctoral aporta al conocimiento integral de los mecanismos que regulan la expresión de proteínas de polaridad, contribuyendo al entendimiento de los posibles mecanismos involucrados en infecciones por virus de gran impacto clínico como el HPV (modelo oncogénico) y el ZIKV (como modelo no oncogénico). Este trabajo también robustece la idea de la existencia de mecanismos comunes de patogénesis viral donde la alteración de la expresión de proteínas de polaridad celular podría favorecer la diseminación viral y/o el desarrollo de patologías asociadas.Ítem Acceso Abierto The lambda variant in Argentina: analyzing the evolution and spread of SARS-CoV-2 lineage C.37(MDPI, 2023-06-16) Nabaes Jodar, Mercedes; Torres, Carolina; Mojsiejczuk, Laura; Acuña, Dolores; Valinotto, Laura; Goya, Stephanie; Natale, Monica; Alexay, Sofia; Amadio, Ariel Fernando; Irazoqui, José Matías; Fernández, Franco; Acevedo, Maria Elina; Alvarez Lopez, Cristina; Angelletti, Andres; Aulicino, Paula; Bolatti, Elisa María; Brusés, Bettina; Cacciabue, Marco; Cavatorta, Ana Laura; Cerri, Agustina; Cordero, Andres; Debat, Humberto; Dus Santos, María José; Eberhardt, María Florencia; Ercole, Regina; Espul, Carlos; Farber, Marisa; Fay, Fabián; Fernández, María Ailén; Ferrini, Florencia; Formichelli, Laura; Ceballos, Santiago; Gallego, Fernando; Giri, Adriana Angélica; Gismondi, María Ines; Acevedo, Raul Maximiliano; Gramundi, Iván; Ibañez, María Eugenia; König, Guido Alberto; Leiva, Viviana; Lorenzini Campos, Melina; Lucero, Horacio; Marquez, Nathalie; Mazzeo, Melina; Mistchenko, Alicia Susana; Montoto, Luciana; Muñoz, Marianne; Nadalich, Victoria; Nardi, Cristina; Ortiz, Belén; Pianciola, Luis; Pintos, Carolina Beatriz; Puebla, Andrea Fabiana; Rastellini, Carolina Victoria; Rojas, Alejandro Ezequiel; Sfalcin, Javier; Suárez, Ariel; Theaux, Clara; Thomas, Guillermo; Tittarelli, Estefanía; Toro, Rosana; Villanova, Gabriela Vanina; Wenk, Gretel; Ziehm, María Cecilia; Zimmermann, María Carla; Zimmermann, María Carla; Proyecto PAIS Working Group; Viegas, MarianaÍtem Acceso Abierto Transcriptional and translational mechanisms contribute to regulate the expression of Disc Large 1 protein during different biological processes(De Gruyter, 2015-03-14) Marziali, Federico Emanuel; Cavatorta, Ana Laura; Bugnon Valdano, Marina Paula; Facciuto, Florencia Natalia; Gardiol, Daniela; ; ; ; ; ;