Examinando por Autor "Brandoni, Anabel"

Mostrando 1 - 6 de 6
  • Miniatura
    ÍtemAcceso Abierto
  • Miniatura
    ÍtemEmbargo
    Análisis de la farmacoterapia de un paciente VIH+ en tratamiento antirretroviral
    (2022) Biscay, Alexis Fernando; Brandoni, Anabel
    Objetivo: Realizar una evaluación de la farmacoterapia y analizar los Problemas Relacionados con los Medicamentos (PRM) en un paciente portador de VIH con antecedentes de múltiples esquemas antirretrovirales. Método: Se seleccionó un paciente de sexo femenino, 44 años con diagnóstico VIH positivo (VIH +) desde junio de 1993 con importante lipodistrofia y antecedentes de estar expuesto a múltiples esquemas antirretrovirales, registrado en el sistema de gestión de pacientes de la Dirección de Sida y Enfermedades de Transmisión Sexual (DSyETS) denominado SVIH. Se realizaron dos entrevistas al paciente donde, con el consentimiento de éste, se hizo un análisis retrospectivo de su historia terapéutica. Se analizaron los diferentes esquemas antirretrovirales evaluando los medicamentos administrados, dosis y duración del tratamiento. Posteriormente se realizó un análisis para detectar PRM. Resultados: Se realizó un análisis farmacoterapéutico retrospectivo a través de la historia clínica de una paciente ambulatoria VIH (+). Se detectaron algunos problemas relacionados a los medicamentos: PRM tipo 1, la paciente utilizaba esquemas antirretrovirales con menos fármacos que los recomendados, la recomendación actual es un mínimo de tres fármacos activos, es decir fármacos a los cuales el virus no haya generado resistencia; y PRM tipo 6 debido a la utilización de fármacos antirretrovirales con efectos adversos agudos y crónicos, algunos, como por ejemplo Zalcitabina no recomendados al día de hoy por su alta toxicidad, durante el historial terapéutico de la paciente. Conclusión: En función de los PRM detectados y teniendo en cuenta los problemas de adherencia que manifestó la paciente durante su historial terapéutico, en este trabajo se propone la posibilidad de administrar un nuevo tratamiento antirretroviral superador que podría evaluarse con el equipo médico que sigue a la paciente para tratar de mejorar tanto la adherencia como la calidad de vida de la paciente. Este nuevo esquema tendría que estar formado por fármacos que tengan menor capacidad para generar desórdenes metabólicos.
  • Miniatura
    ÍtemEmbargo
    Estudio de la expresión renal de proteínas tubulares con diferentes funciones en ratas con colestasis extrahepática. Evaluación de proteínas apicales como posibles biomarcadores tempranos de daño renal
    (2021) Nosetto, Evangelina Cecilia; Brandoni, Anabel; Torres, Adriana Mónica
    La colestasis extrahepática es una patología caracterizada por una disminución o ausencia del flujo de bilis desde el hígado hacia el intestino, debido a la presencia de una obstrucción en el conducto biliar. Como consecuencia, las sustancias que normalmente son excretadas por esta vía, como las sales biliares y la bilirrubina, retornan al torrente sanguíneo. Entre las posibles causas que subyacen a esta patología se pueden mencionar un tumor en el conducto biliar o el páncreas, una coledocolitiasis o una estenosis de origen cicatricial. A causa de la colestasis extrahepática, y según el tiempo de permanencia de la misma, el riñón también puede presentar alteraciones. Es poco lo que se conoce acerca de las alteraciones renales que se presentan en colestasis extrahepática, sobre todo a cortos de tiempo de evolución de la misma. Debido a que en esta patología la excreción hepática de compuestos a través de la bilis se encuentra impedida, el riñón, como otro órgano principal en la eliminación de sustancias del organismo, puede compensar esta función a través de la eliminación urinaria de compuestos que normalmente serían eliminados por la vía biliar. En conexión con esto, la expresión de transportadores de aniones orgánicos (Oat), como Oat1 y Oat3, también se encuentra alterada en la colestasis extrahepática. Los transportadores Oat1 y Oat3 se localizan en la membrana basolateral de las células del túbulo proximal, donde participan en la eliminación renal de compuestos de importancia farmacológica y toxicológica, como algunos antibióticos, diuréticos y antivirales, protegiendo así al organismo del posible efecto tóxico de estas sustancias. En particular, en un modelo de colestasis extrahepática de 21 h realizado a través de la ligadura del conducto biliar en ratas, se observó un aumento de la expresión proteica de Oat1 en homogenados y membranas basolaterales de corteza renal, mientras que la abundancia proteica de Oat3 aumentó en homogenados y se mantuvo sin diferencias en membranas basolaterales corticales. La expresión de toda proteína debe regularse estrechamente para llevar a cabo su función normal, lo cual puede incluir una regulación a largo plazo, que afecta la transcripción y traducción de la proteína, y una regulación a corto plazo que altera la estabilidad, la distribución y el tráfico, entre otros procesos. Previamente, otros autores han reportado la colocalización de Oat1 y Oat3 con las proteínas caveolinas, Cav-1 y Cav-2. Las caveolinas son proteínas transmembrana que forman microdominios de membrana especializados en combinación con colesterol y esfingolípidos, denominados caveolas. Las caveolas son un subtipo de lipid raft que funcionan como plataformas en las que es posible modular la localización, la estabilidad conformacional y la afinidad por ligando de las proteínas residentes. Además de la alteración en la expresión de transportadores renales, la colestasis extrahepática de 21 h en ratas, produce una alteración en el manejo renal de agua y osmoles, generando un aumento del flujo urinario y una disminución de la osmolalidad urinaria. En conexión con esto, cabe mencionar a dos proteínas involucradas en el manejo de agua y osmoles en el riñón. Por un lado, AQP2 que es un canal de agua localizado en las células del túbulo conector y colector renal, que cambia su localización apical o subapical según las necesidades de reabsorción de agua para generar una orina concentrada o diluida. Con respecto al manejo de electrolitos, NKCC2 se localiza en la rama ascendente gruesa del asa de Henle, donde realiza un transporte activo de electrolitos, reabsorbiendo NaCl hacia el líquido intersticial y contribuyendo en la creación del gradiente de concentración corticomedular. Por otro lado, en lo pertinente a la función renal, evaluada a través de los parámetros clásicos de uso habitual en la clínica, como uremia y creatininemia, no se observan alteraciones luego de 21 h de obstrucción biliar. Aun así, estudios precedentes en ratas con colestasis obstructiva de 72 h han demostrado una disminución de la velocidad de filtración glomerular, indicando, de esta manera, una alteración de la función renal. En este trabajo de Tesis, con el objetivo de profundizar en el conocimiento acerca de los cambios que subyacen a las alteraciones renales observadas en presencia de colestasis extrahepática en un estadio temprano de la patología, se planteó en primer lugar, analizar algunos componentes que pudiesen influir en la expresión y función de Oat1 y Oat3. Para esto, se evaluó el efecto de la incubación de células aisladas de corteza renal con sueros de ratas con colestasis extrahepática de 21 h. También se evaluó la distribución de las proteínas Oat1 y Oat3 en microdominios de membrana en animales controles y además se estudió si la colestasis extrahepática provoca una alteración en la distribución de estas proteínas entre dichos microdominios. Además se evaluó la expresión de Cav-1 y Cav-2 en animales con colestasis extrahepática. Luego, para profundizar en las alteraciones del manejo de agua y osmoles previamente observadas, se analizó la expresión proteica de NKCC2 y AQP2, dos proteínas involucradas en el manejo de electrolitos y agua, respectivamente, a nivel renal. Finalmente, se analizó la excreción urinaria de las proteínas apicales analizadas en tejido renal, en la búsqueda de potenciales biomarcadores tempranos que detecten las alteraciones funcionales que se producen posteriormente en el riñón a causa de la evolución de la colestasis extrahepática. Para ello, el modelo experimental elegido fue el de colestasis extrahepática por ligadura del conducto biliar común. Se trabajó con dos grupos experimentales, el grupo de animales controles, grupo Sham y el de animales que presentaron colestasis extrahepática, grupo BDL. En una primera instancia, se caracterizó la patología de colestasis extrahepática. Se observó un aumento de los marcadores bioquímicos clásicos de la patología, como la bilirrubina directa y la fosfatasa alcalina en plasma, los cuales se encontraron aumentados, demostrando la instauración de la patología en ratas BDL. También se observó un aumento en los niveles plasmáticos de sales biliares y colesterol total, compuestos que son secretados en la bilis, y que debido a la obstrucción biliar se acumulan en sangre; y de las aminotransferasas marcadoras de lesión hepática, alanina aminotransferasa y aspartato aminotransferasa. Los parámetros indicativos de función renal, como uremia, creatininemia, fosfatasa alcalina en orina, y velocidad de filtración glomerular no mostraron alteraciones en animales BDL. Por otro lado, se halló un aumento del flujo urinario, y de la excreción fraccional de agua y osmoles. Luego, se evaluó el efecto directo de los sueros de ratas con colestasis extrahepática sobre la expresión proteica de Oat1 y Oat3 en células de corteza renal. Se observó que el suero BDL promueve un aumento de la expresión de Oat1 en membranas celulares, mientras que Oat3 se mantuvo sin diferencias significativas, como sucede en el modelo in vivo de colestasis extrahepática en ratas. De este modo, se halló que algún o algunos componentes presentes en el suero BDL son capaces de alterar la expresión proteica del transportador de aniones orgánicos Oat1. También se caracterizó la distribución de Oat1 y Oat3 en corteza renal de ratas control, específicamente entre microdominios caveolares (raft) y no caveolares (no raft) de la membrana plasmática. Se encontró una proporción mayor de Oat1 en la fracción raft de la membrana plasmática, respecto de la no raft. Para Oat3, la proporción localizada en la fracción raft y no raft fue similar. Estas observaciones indican que en un estado fisiológico, Oat1 y Oat3, a nivel renal, se encuentran asociadas con el dominio caveolar de la membrana, lo cual está de acuerdo con la colocalización de Oat1 y Oat3 con las proteínas Cav-1 y Cav-2, marcadoras de caveolas, reportado previamente. Posteriormente, considerando las alteraciones observadas en la expresión renal de Oat1 y Oat3 en presencia de colestasis extrahepática, se evaluó si esta patología afecta la distribución de dichas proteínas entre los microdominios raft y no raft de la membrana plasmática. Para Oat1, la colestasis extrahepática indujo una redistribución significativa de la proteína desde dominios raft hacia dominios no raft de la membrana. En el caso de Oat3, la patología no provocó una redistribución del transportador entre los microdominios de membrana. Por lo tanto, con este hallazgo existe evidencia de que el aumento en la expresión de Oat1 observado en membranas basolaterales de ratas BDL, se produce junto con el movimiento del transportador hacia la fracción no raft de la membrana plasmática. En esta parte del trabajo se evaluó también si la patología afecta a la distribución de Cav-1 y Cav-2, y al contenido de colesterol entre los microdominios raft y no raft, ya que los mismos son componentes característicos de los rafts caveolares. Ni la distribución de caveolinas, ni el contenido de colesterol en las caveolas, se encontraron alterados en presencia de colestasis obstructiva. También se evaluó el efecto de la colestasis obstructiva en la expresión de Cav-1 y Cav-2, a nivel de homogenados, membranas apicales y membranas basolaterales de corteza renal. En conjunto la patología provocó una disminución de la expresión de Cav-1 y Cav-2 en membranas apicales, y un aumento de las mismas a nivel basolateral, sin cambios en homogenados. Estos datos permiten inferir que, a nivel basolateral, la colestasis extrahepática promovería una translocación de Cav-1 y Cav-2 hacia la membrana. Por el contrario, en el lado apical, la patología induciría el tráfico de Cav-1 y Cav-2 hacia el citoplasma, o un vuelco de las mismas en la orina, como ha sido descripto para otras proteínas apicales en presencia de patologías renales. Las caveolinas han sido involucradas en una amplia variedad de procesos celulares, como la transducción de señal, el tráfico vesicular, el mantenimiento de los niveles de colesterol intracelular, entre otros. Por esta razón, la variación en la expresión de Cav-1 y Cav-2 hallada en las membranas apical y basolateral de células de corteza renal puede deberse a que las mismas estén influenciando diversos procesos en esta patología, tales como el tráfico vesicular o la transducción de señal. Posteriormente, considerando el aumento del flujo urinario y el aumento de las excreciones fraccionales de agua y osmoles en presencia de colestasis obstructiva, se analizó el efecto de la patología en la expresión proteica de NKCC2 y AQP2 en homogenados y membranas apicales de corteza y médula renal. Para NKCC2 en corteza, la patología no indujo cambios de su expresión proteica en homogenados y provocó una disminución de su abundancia en membranas apicales. A nivel medular, la expresión de NKCC2 no se modificó en colestasis extrahepática, tanto en homogenados, como en membranas apicales. AQP2, por su parte, no mostró variaciones en su expresión cortical, tanto en homogenados como en membranas apicales. En médulas, AQP2 disminuyó en homogenados y en membranas apicales en ratas BDL. La disminución de la expresión de NKCC2 en membranas apicales de corteza puede conllevar a una reducción de la hipertonicidad intersticial, disminuyendo la reabsorción de electrolitos y evitando, en consecuencia, la posterior reabsorción de agua. Por otro lado, la disminución de AQP2 a nivel medular conllevaría a una disminución de la reabsorción de agua en el túbulo colector, lo cual contribuiría al aumento observado previamente en el flujo urinario de animales BDL. Dado que previamente se ha reportado una posible relación entre las caveolinas y AQP2, en esta parte del trabajo también se evaluó la expresión de caveolinas en tejido medular en colestasis extrahepática. Los resultados indicaron una disminución significativa de Cav-1 y Cav-2 en membranas apicales medulares de ratas BDL, mientras que en homogenados se mantuvieron sin diferencias entre los grupos. Esta alteración en la expresión de Cav-1 y Cav- 2 en membranas apicales medulares podría influir en procesos que modifiquen la expresión de AQP2 en la membrana apical de las células principales del túbulo colector, la cual a su vez se mostró disminuida en colestasis extrahepática. Aun así, como fue mencionado anteriormente, las caveolinas podrían alterar su expresión para influenciar otros procesos biológicos en colestasis obstructiva, dada la variedad de procesos en los que participan. En los últimos años, nuestro grupo de investigación ha trabajado en la búsqueda de biomarcadores urinarios que indiquen en forma temprana la presencia de alteraciones renales en otras patologías. En el modelo de colestasis obstructiva de 21 h en ratas, no se observan cambios significativos de la función renal, mientras que luego de 72 h de instaurada la patología se detecta una alteración de la función renal en ratas, asociada a una disminución de la velocidad de filtración glomerular. De este modo, resultó interesante evaluar el efecto de la colestasis extrahepática en la excreción urinaria de las proteínas apicales analizadas en este trabajo de Tesis: Cav-1, Cav-2, NKCC2 y AQP2, para explorar su potencial como biomarcadores urinarios de alteraciones renales en presencia de colestasis extrahepática. También se examinó la excreción urinaria de la Lipocalina asociada a gelatinasa de neutrófilos (NGAL), un biomarcador urinario de lesión renal descripto recientemente. Los resultados mostraron que la colestasis extrahepática induce un aumento significativo de la excreción urinaria de Cav-1 y Cav-2. Por otro lado, no se observaron modificaciones en la excreción urinaria de NKCC2, AQP2 ni NGAL en ratas BDL. Entonces, los niveles urinarios significativamente aumentados de Cav-1 y Cav-2 en colestasis extrahepática de 21 h, podrían representar biomarcadores tempranos, con el potencial de predecir subsecuentes alteraciones renales en tiempos mayores de colestasis obstructiva. Además, es importante resaltar que, en base a nuestro conocimiento, este es el primer trabajo en detectar la presencia de Cav-1 en orina de ratas control. Los resultados obtenidos en este trabajo de Tesis contribuyen al conocimiento de las modificaciones inducidas por la colestasis obstructiva aguda en la expresión renal y en la excreción urinaria de proteínas con diferentes funciones a lo largo del túbulo renal. Estos conocimientos son de relevancia clínica debido al rol que cumplen estas proteínas en la función renal, y además, debido a su potencialidad como biomarcadores tempranos y no invasivos de alteraciones de la función renal frente a la colestasis obstructiva.
  • Miniatura
    ÍtemAcceso Abierto
    Excreción urinaria de transportadores de aniones orgánicos en nefropatía obstructiva. Potenciales biomarcadores de daño renal
    (2019) Campagno, Romina Valeria; Torres, Adriana Mónica; Brandoni, Anabel
    La modificación de la función renal por obstrucción del tracto urinario, es una condición conocida con el nombre de nefropatía obstructiva. La lesión renal obstructiva ocasiona alteraciones estructurales y funcionales que afectan principalmente a los segmentos tubulares de la nefrona. Si bien es una situación reversible, una interrupción prolongada del flujo de orina (más de 24 horas) puede provocar pérdida de nefronas, con reducción de la tasa de filtración glomerular y deterioro en el manejo tubular de agua y solutos. Además, cuando la obstrucción es bilateral y completa, el daño puede persistir incluso después de que se haya resuelto el problema. Por lo tanto, la detección temprana es extremadamente necesaria para asegurar una recuperación óptima de la función renal. Los marcadores tradicionales utilizados en la práctica clínica para el reconocimiento de la enfermedad renal, son poco sensibles e inespecíficos. La creatinina plasmática, por ejemplo, es un indicador subóptimo dado que sólo considera la tasa de filtración glomerular y los cambios funcionales, sin tener en cuenta las situaciones subclínicas, en donde los riñones muestran indicios de daño a pesar de no presentar alteraciones manifiestas de su función. A consecuencia de esto, surge la necesidad de hallar nuevos biomarcadores que permitan entre otras cosas, mayor capacidad de diagnóstico, identificación precoz del riesgo y elevada eficacia predictiva respecto de la progresión de la enfermedad renal. La mayoría de los biomarcadores recientemente descriptos son péptidos y proteínas de membrana que presentan variaciones en cuanto a su distribución tisular, la función, y el momento de su liberación después de la lesión renal. En muchas ocasiones, la pérdida de integridad de los epitelios tubulares conduce al volcado de diferentes proteínas hacia el interior de la luz tubular, promoviendo su aparición en la orina. Esta situación y el hecho de ser moléculas en íntimo contacto con el sitio de la lesión, las convierte en excelentes biomarcadores de lesión renal, con el potencial de brindar diferente tipo de información. Los transportadores de aniones orgánicos son proteínas integrales de membrana, capaces de mediar el transporte de una gran variedad de compuestos, entre ellos metabolitos endógenos, fármacos de importancia clínica y agentes xenobióticos. El Transportador de aniones orgánicos 5 (Oat5), el Cotransportador Na+/Dicarboxilatos 1 (NaDC1) y el Polipéptido transportador de aniones orgánicos 1 (Oatp1), son algunos de los transportadores de aniones orgánicos más importantes localizados a nivel renal. Las tres proteínas se expresan en las membranas apicales de las células del túbulo proximal, y en consecuencia son susceptibles de aparecer en el fluido tubular, en situaciones de daño renal obstructivo. Por lo tanto el objetivo general del presente trabajo de Tesis consistió en analizar la excreción urinaria de Oat5, NaDC1 y Oatp1 en un modelo experimental de nefropatía obstructiva en ratas, para determinar su potencialidad como biomarcadores de lesión renal obstructiva. Para tal fin, se realizaron estudios en grupos experimentales de ratas a las cuales se les practicó una cirugía de obstrucción ureteral bilateral (OUB) completa, de diferente duración: 1, 2, 5 y 24 horas. Luego de liberar dicha obstrucción, los animales se mantuvieron durante 24 horas en jaulas metabólicas para la recolección de las muestras de orina. En una primera instancia, se caracterizó el modelo experimental de nefropatía obstructiva. Se observó: aumento en los niveles plasmáticos de urea y creatinina; disminución del clearance renal de creatinina; y aumento de las concentraciones de la Lipocalina asociada a la gelatinasa de neutrófilos (NGAL), glucosa y proteínas totales en la orina de los animales con 5 y 24 horas de obstrucción ureteral. Además, se observaron incrementos en el flujo urinario y en las excreciones fraccionales de agua y osmoles de estos dos grupos experimentales. En paralelo, los estudios en tejido renal revelaron aumentos del peso renal y un importante daño en el tejido a nivel del epitelio tubular, evidenciado mediante estudios histopatológicos. Luego se analizó la excreción urinaria de los transportadores de aniones orgánicos Oat5, NaDC1 y Oatp1, y se los comparó con marcadores tradicionales de lesión renal, para evaluar su potencial como biomarcadores de esta patología. Se observó un aumento en la excreción urinaria de Oat5 en todos los grupos experimentales, incluso en aquellos con obstrucciones ureterales de corta duración (1 hora). La excreción urinaria de NaDC1 aumentó en todos los grupos experimentales, mostrando un patrón de incremento regular a medida que el tiempo de obstrucción se hizo más prolongado. El análisis de regresión permitió corroborar la correlación positiva entre las dos variables (NaDC1 urinaria y tiempo de obstrucción), con un alto grado de significancia. Respecto de la excreción urinaria de Oatp1, sólo se detectó banda reactiva en la orina de los animales OUB, incluso en aquellos con tiempos de obstrucción ureteral cortos (OUB1). Por otro lado, no se detectó señal alguna en la orina de los animales Sham. Según nuestro conocimiento, este es el primer estudio que informa no sólo la detección de Oatp1 en muestras de orina, sino también el primero que analiza a los tres transportadores en el contexto de la enfermedad renal obstructiva. En contraste con los niveles plasmáticos de urea y creatinina, el clearance renal de creatinina, la excreción urinaria de NGAL y el resto de los parámetros de función renal analizados, los niveles urinarios de Oat5, NaDC1 y Oatp1 aumentaron significativamente en todos los grupos experimentales a los que se les practicó la cirugía de obstrucción de uréteres, incluso en aquellos con tiempos de obstrucción ureteral cortos. Cuando el tiempo de obstrucción fue muy corto (OUB1), los únicos parámetros modificados fueron los niveles urinarios de Oat5, NaDC1 y Oatp1. Ni los indicadores clásicos de función renal, como la urea y la creatinina, ni otros biomarcadores descritos más recientemente, como la NGAL urinaria, se alteraron en respuesta al daño renal obstructivo. Por lo tanto, las excreciones urinarias de Oat5, NaDC1 y Oatp1 podrían ser consideradas como biomarcadores diagnóstico tempranos, más sensibles que otros para predecir la lesión renal obstructiva. Además, el patrón de excreción mostrado por NaDC1 indicaría su potencialidad como biomarcador capaz de brindar información acerca del tiempo transcurrido desde el inicio del evento obstructivo. Por otro lado, la expresión renal de las tres proteínas se encontró modificada en respuesta a la obstrucción. En los homogenados totales de riñón, Oat5 disminuyó en todos los grupos experimentales analizados, mientras que NaDC1 disminuyó en OUB5 y OUB24. Por su parte, la expresión renal de Oatp1 no presentó alteraciones en los homogenados renales de los animales con OUB. Las modificaciones observadas a nivel del tejido renal podrían ser el resultado de alteraciones en los procesos de síntesis y/o degradación proteica ocasionados por la nefropatía obstructiva. Además, el hecho de que las tres proteínas respondan de manera distinta a la obstrucción revelaría mecanismos regulatorios diferentes para cada una de ellas, en función de la gravedad del cuadro. En las membranas apicales renales, lugar donde estas proteínas se expresan y son funcionales, Oat5 disminuyó en todos los grupos experimentales. Por su parte NaDC1 disminuyó en OUB5 y OUB24, en paralelo con el aumento en la excreción fraccional de citrato de estos grupos. El citrato es un sustrato endógeno de NaDC1 de relevancia fisiológica, debido a su rol como inhibidor de la formación de cálculos renales. Por otro lado, la expresión de Oatp1 en membranas aumentó sólo en OUB24. Las modificaciones observadas en la expresión renal de proteínas transportadoras de membrana son un hecho de relevancia clínica debido a que implican consecuencias directas sobre el manejo renal de fármacos y metabolitos endógenos transportados por estas proteínas. Tales cuestiones deberían ser tenidas en cuenta, por ejemplo, a la hora de diseñar regímenes de dosificación y planes terapéuticos, para evitar futuras complicaciones. Los resultados obtenidos en el presente trabajo de Tesis aportan nueva información acerca de las modificaciones inducidas por la nefropatía obstructiva en la expresión renal y en la excreción urinaria de diferentes proteínas transportadoras de aniones orgánicos. Estos conocimientos son de relevancia clínica debido al rol que cumplen estas proteínas en la función renal, y además, debido a su potencialidad como novedosas herramientas no invasivas para el diagnóstico temprano de la enfermedad renal obstructiva.
  • Miniatura
    ÍtemAcceso Abierto
    Expression of renal Oat5 and NaDC1 transporters in rats with acute biliary obstruction
    (Baishideng, 2015-08-07) Brandoni, Anabel; Torres, Adriana Mónica
    AIM: To examine renal expression of organic anion transporter 5 (Oat5) and sodium-dicarboxylate cotransporter 1 (NaDC1), and excretion of citrate in rats with acute extrahepatic cholestasis. METHODS: Obstructive jaundice was induced in rats by double ligation and division of the common bile duct (BDL group). Controls underwent sham operation that consisted of exposure, but not ligation, of the common bile duct (Sham group). Studies were performed 21 h after surgery. During this period, animals were maintained in metabolic cages in order to collect urine. The urinary volume was determined by gravimetry. The day of the experiment, blood samples were withdrawn and used to measure total and direct bilirubin as indicative parameters of hepatic function. Serum and urine samples were used for biochemical determinations. Immunoblotting for Oat5 and NaDC1 were performed in renal homogenates and brush border membranes from Sham and BDL rats. Immunohistochemistry studies were performed in kidneys from both experimental groups. Total RNA was extracted from rat renal tissue in order to perform reverse transcription polymerase chain reaction. Another set of experimental animals were used to evaluate medullar renal blood flow (mRBF) using fluorescent microspheres. RESULTS: Total and direct bilirubin levels were significantly higher in BDL animals, attesting to the adequacy of biliary obstruction. An important increase in mRBF was determined in BDL group (Sham: 0.53 ± 0.12 mL/min per 100 g body weight vs BDL: 1.58 ± 0.24 mL/min per 100 g body weight, P < 0.05). An increase in the urinary volume was observed in BDL animals. An important decrease in urinary levels of citrate was seen in BDL group. Besides, a decrease in urinary citrate excretion (Sham: 0.53 ± 0.11 g/g creatinine vs BDL: 0.07 ± 0.02 g/g creatinine, P < 0.05) and an increase in urinary excretion of H+ (Sham: 0.082 ± 0.03 μmol/g creatinine vs BDL: 0.21 ± 0.04 μmol/g creatinine, P < 0.05) were observed in BDL animals. We found upregulations of both proteins Oat5 and NaDC1 in brush border membranes where they are functional. Immunohistochemistry technique corroborated these results for both proteins. No modifications were observed in Oat5 mRNA and in NaDC1 mRNA levels in kidney from BDL group as compared with Sham ones. CONCLUSION: Citrate excretion is decreased in BDL rats, at least in part, because of the higher NaDC1 expression. Using the outward gradient of citrate generated by NaDC1, Oat5 can reabsorb/eliminate different organic anions of pathophysiological importance.
  • Miniatura
    ÍtemAcceso Abierto
    Renal expression and urinary excretion of Na-K-2Cl cotransporter in obstructive nephropathy
    (Hindawi, 2017-01-10) Brandoni, Anabel; Torres, Adriana Mónica