Estrategias de combinación de citoquinas con nutracéuticos para el tratamiento del carcinoma hepatocelular: suplementación con δ-tocotrienol o quercetina a una terapia con interferon α-2b

El carcinoma hepatocelular (HCC) es la tercera causa más común de muerte por cáncer en todo el mundo, representando el 70-85% de todos los cánceres de hígado. El interferón α (IFN α) se ha utilizado históricamente para evitar la progresión del daño hepático, así como para la prevención de la progresión del HCC en pacientes con hepatitis B o C crónica. Algunos estudios informaron una fuerte actividad antitumoral de IFN α y una mejora en la tasa de supervivencia de pacientes con HCC cuando se administra en combinación con otras terapias de apoyo. Los nutracéuticos son alimentos de origen natural que proveen beneficios medicinales o saludables. Dentro de los mismos se encuentran los tocotrienoles, isómeros de la vitamina E, y la quercetina, el flavonoide más abundante procedente del metabolismo secundario de los vegetales. El δ-tocotrienol presenta, entre todas las isoformas naturales de la vitamina E, las actividades antiproliferativas más potentes contra varios tipos de cáncer, in vitro e in vivo; también presenta la mayor citotoxicidad en células cancerígenas y es el más antiangiogénico. Por otro lado, la quercetina tiene efectos quimiopreventivos en modelos animales de hepatocarcinogénesis, y se evidenció que posee propiedades antiangiogénicas in vitro e in vivo, como también capacidades antiproliferativas. En base a esto, se decidió estudiar la suplementación con δ-tocotrienol o quercetina a una terapia con IFN α y evaluar si existe algún efecto beneficioso entre estos compuestos en el tratamiento del HCC, utilizando diferentes modelos experimentales in vitro, y analizando el posible mecanismo implicado. Se utilizaron 2 líneas celulares: SK-HEP-1 y Huh7, ambas de HCC humano, a las cuales se les aplicaron los tratamientos individuales con IFN α-2b (grupo IFN), δ-tocotrienol (grupo E) y quercetina (grupo Q) y posteriormente se realizaron las combinaciones, IFN α + δ- tocotrienol (grupo IE) y IFN α + quercetina (grupo IQ). Las dosis utilizadas fueron: 10000 UI/ml y 20000 UI/ml de IFN α para las células SK-HEP-1 y Huh7 respectivamente, 25 uM de δ-tocotrienol para ambas células y 12,5 uM de quercetina para las células SK-HEP-1. Se evaluó el impacto de los tratamientos individuales y combinados sobre la viabilidad, migración e invasión celular. Ambas combinaciones resultaron ser beneficiosas, disminuyendo dichos procesos significativamente respecto a cada tratamiento individual. A dichos estudios se sumaron el análisis de los cambios en la expresión de las proteínas que actúan como reguladores críticos para el destino de las células cancerosas, como el antígeno nuclear de proliferación celular (PCNA), y las metaloproteinasas de matriz MMP- 7 y MMP-9, las cuales disminuyeron cuando las células se trataron con las combinaciones de los compuestos en estudio. Luego se demostró que los compuestos IFN α y δ-tocotrienol aumentaron la apoptosis a través de la vía mitocondrial en células SK-HEP-1 y Huh7, tanto individualmente como cuando se combinaron. Por otra parte, la quercetina no aumentó la apoptosis en células SK Hep-1; sin embargo, cuando se combinó con IFN α el aumento de la muerte celular por apoptosis fue significativamente mayor respecto al tratamiento individual. Con el fin de estudiar los mecanismos implicados en los efectos observados, se demostró que la combinación de IFN α con δ-tocotrienol actúa a través de la modulación de la vía Erk de las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPK), de la generación de especies reactivas del oxígeno (EROs), e induce cambios en la expresión de la vía p38/MAPK y Notch. Por otro lado, la combinación de IFN α con quercetina actúa a través de la vía p38/MAPK en combinación con la generación de EROs. Por último, se evaluó el impacto de los tratamientos individuales y combinados sobre la angiogénesis, utilizando el modelo in vivo de la membrana corioalantoidea de pollo, demostrando que ambos tratamientos combinados producen una disminución en la formación de vasos sanguíneos nuevos, siendo esta disminución de mayor magnitud a la observada con los tratamientos individuales. En resumen, demostramos que tanto la suplementación con δ-tocotrienol como con quercetina a una terapia con IFN α potencia los efectos antitumorales de la citoquina contra las células de HCC, reduciendo la proliferación celular, la invasividad, la angiogénesis y aumentando la muerte celular apoptótica. En este sentido, un enfoque de tratamiento que utilice inmunoquímicos junto con productos naturales, como los utilizados en nuestro estudio, podría contribuir a establecer nuevas propuestas terapéuticas para el tratamiento del HCC.