Criopreservación de Células Madre Neuronales Embrionarias (CMNEs) mediante la metodología de enfriamiento lento

La habilidad de las células madre para actuar como fuente de nuevas células diferenciadas y de regenerar tejidos, las hacen una herramienta prometedora para las terapias regenerativas con la intención de restaurar los daños producidos por una lesión aguda o enfermedad crónica. Las células madre neurales (CMNs) son una promesa para las terapias de reparación y regeneración debido a su ubicación única dentro del Sistema Nervioso Central (SNC), a su potencial para proliferar y diferenciarse en todas las principales líneas neuronales, y a su habilidad para incorporarse funcionalmente dentro de circuitos neuronales preexistentes. Uno de los métodos más utilizados para la preservación de dichas células es la criopreservación por enfriamiento lento. Es necesario destacar que en los estudios publicados, se ha realizado una escasa investigación sistemática sobre las variables criobiológicas asociadas con el daño producido por el enfriamiento lento. Se destaca la falta de estudios sistemáticos relacionados con variables como la velocidad de enfriamiento, concentración y tipo del agente crioprotector (ACP), los efectos osmóticos asociados a la introducción y remoción del ACP, la temperatura y la velocidad a la cual se realiza este procedimiento, entre otros, faltantes que dieron la base del desarrollo de esta Tesina. En el presente trabajo se llevaron a cabo diversos estudios con el objeto de contribuir al desarrollo de un protocolo de preservación de células madre neural embrionarias (CMNEs). Para su realización, fue necesario controlar e investigar sistemáticamente las variables asociadas al daño celular que ocurren durante el enfriamiento lento en sistemas donde el material es congelado como una suspensión de células aisladas. Partiendo de parámetros pre- establecidos en nuestro laboratorio, se realizaron estudios a una dada velocidad de enfriamiento con el objetivo de evaluar el efecto de la misma y del tiempo de almacenamiento sobre diversos parámetros celulares como el tamaño, forma y capacidad de proliferación.