Desarrollo de fitomedicinas antifúngicas a partir de plantas de la flora argentina

Las infecciones fúngicas han aumentado considerablemente en los últimos años, siendo las ocasionadas por Candida albicans, la principal causa de muerte en individuos inmunocomprometidos. El tratamiento se ve dificultado por el limitado número de drogas antifúngicas en el mercado, cuya eficacia está comprometida por la toxicidad para el hospedero, el estrecho espectro de acción, la emergencia de resistencia y los altos costos. Es por ello que este trabajo se centró en la búsqueda de extractos bioactivos contra C. albicans utilizando nuevas metodologías, como la combinación de extractos naturales con drogas comerciales, con el fin de encontrar actividad antifúngica sinérgica o aditiva; y la irradiación de extractos con luz UV-A, con el fin de excitar moléculas fotoactivas que dañen la levadura mediante estrés oxidativo. Se realizó un screening de 266 extractos obtenidos a partir de 95 especies vegetales argentinas mediante la estrategia clásica (incubación del extracto en solitario con el hongo) y las dos estrategias planteadas anteriormente. Con la estrategia clásica, sólo 28 extractos mostraron actividad en solitario (10,53%). En combinación con antifúngicos comerciales, se obtuvieron 43 extractos activos (16,17%) con al menos uno de los antifúngicos evaluados. Se determinó el tipo de interacción entre 28 extractos activos con itraconazol (ITZ) mediante el método de Tablero de ajedrez, mostrando el 46,43% (13 extractos) interacciones sinérgicas. Se utilizó el programa estadístico Minitab® para evaluar mezclas ternarias manteniendo como componentes comunes, ITZ y un extracto de Zuccagnia punctata, y variando el tercer componente de a uno por vez entre los 12 extractos restantes que habían mostrado sinergismo. Se seleccionaron como mezclas ternarias óptimas aquellas que contenían como tercer componente a los extractos de Ameghinoa patagonica, Scoparia dulcis y Gaillardia megapotamica. Se demostró que las tres mezclas ternarias actuarían por el mecanismo de unión a ergosterol de la membrana fúngica. Mediante la estrategia en combinación con luz, se obtuvieron 31 extractos (11,65%) activos, siendo los extractos hexánico y diclorometánico de raíz de Thymophylla pentachaeta, los más activos. La evaluación de mecanismos fotodinámicos mostró que ambos extractos generan especies reactivas del oxígeno mediante mecanismos tipo I y tipo II. La determinación del espectro de acción evidenció que tanto las mezclas como los extractos fotoactivos poseen actividad contra la mayoría de las especies del género Candida, Cryptococcus neoformans y los dermatofitos ensayados. A través del estudio de la capacidad de inhibición de factores de virulencia fúngicos, se observó que tanto las mezclas como los extractos fotoactivos, disminuyen la adherencia a células epiteliales, la formación de tubo germinativo y pseudomicelio, y la secreción de enzimas hidrolíticas. También se observó que las mezclas inhiben la formación de biofilm y tanto las mezclas como los extractos actúan sobre células de biofilms preformados. Las mezclas formadas por Scoparia dulcis y Ameghinoa patagonica no presentaron actividad citotóxica tanto in vitro como in vivo. Las tres mezclas mostraron actividad antifúngica in vivo en el modelo Caenorhabditis elegans. Estos resultados sientan las bases para el desarrollo de tratamientos alternativos contra C. albicans, con disminuidos efectos adversos respecto de los fármacos antifúngicos ya establecidos.