Rol de la transducción de señales y de los mecanismos endocítico-degradativos en colestasis: Su modulación por el agente terapéutico ácido ursodesoxicólico

El estradiol 17β-D-glucurónido (E217G) induce colestasis al desencadenar la endocitosis y una posterior retención intracelular de los transportadores canaliculares Bsep y Mrp2, a través de la activación de las vías de señalización cPKC y PI3K/Akt, respectivamente. La colestasis del embarazo, se asocia al aumento de los niveles hepatocelulares de E217G. El tratamiento de primera línea para esta patología es el ácido ursodesoxicólico. Dado que los mecanismos de acción protectores de AUDC en la colestasis inducida por E217G no han sido elucidados, en este trabajo de tesis evaluamos si el tauroursodesoxicolato (TUDC), principal metabolito activo de UDCA, previene la endocitosis de transportadores canaliculares al contrarrestar la activación cPKC y PI3K/Akt inducida por E217G. Para ello, estudiamos, en primera instancia, el efecto de TUDC en las fallas secretoras de los transportadores Bsep y Mrp2 producidas por E217G en los modelos de duplas aisladas de hepatocitos de rata e hígado aislado y perfundido de rata. En ambos modelos, encontramos que TUDC previene las alteraciones secretoras producidas tanto sobre Bsep como sobre Mrp2. Además, en el modelo de hígado aislado y perfundido de rata, evaluamos el efecto de TUDC sobre la disminución del flujo biliar producido por el estrógeno, encontrando que TUDC mejora dicho parámetro. En este último modelo, también realizamos estudios de la localización de los transportadores canaliculares de interés por inmunotinción seguido de microscopía confocal, lo cual reveló que TUDC previene la desinserción y deslocalización de ambos transportadores. Por otro lado, para estudiar las vías que participan en este mecanismo protector, mediante la utilización del modelo de hepatocitos aislados de rata y subsiguiente análisis por Western blot, pudimos determinar que TUDC previene el encendido de las vías de señalización cPKC y PI3K, evitando así que los transportadores permanezcan internalizados por acción de E217G. También demostramos que el mecanismo por el cual TUDC inhibe el encendido de dichas vías de señalización requiere del aumento de Ca2+ citosólico, la formación del complejo Ca2+-CaM y la subsiguiente activación de la CaMKII. Por otro lado, en este trabajo de tesis, indagamos sobre el destino post-endocítico de los transportadores canaliculares endocitados ante un insulto colestásico sostenido por tiempos prolongados. Observamos, utilizando el modelo de hepatocitos en sándwich de colágeno, que el transportador canalicular Mrp2, pero no Bsep, es degradado vía proteosomal a las 24 h de tratamiento con los agentes colestásicos E217G y taurolitocolato (TLC), viéndose afectadas tanto su localización como su función de transporte. Estas alteraciones fueron prevenidas cuando se cotrataron los hepatocitos con TUDC y E217G. Estos hallazgos aportan conocimientos sobre los patomecanismos colestásicos del E217G y los mecanismos por el cual el TUDC actúa como agente anticolestásico en patologías colestásicas provocadas por el compuesto estrogénico. Esto ayuda a la comprensión de los mecanismos anticolestásicos del TUDC, y permite contar con información novel acerca de los nuevos blancos terapéuticos en la colestasis por estrógenos, de potencial utilidad para el desarrollo de fármacos alternativos al TUDC, con acción terapéutica efectiva en mujeres con colestasis del embarazo no respondedoras al tratamiento convencional con el ácido ursodesoxicólico.