Expresión de la fosfolipasa ChPLC en Corynebacterium glutamicum

Abstract

La creciente demanda de bioprocesos industriales más sostenibles ha motivado el reemplazo de tratamientos químicos por alternativas enzimáticas, más eficientes y ambientalmente amigables. En este contexto, el desarrollo de plataformas robustas para la producción de enzimas recombinantes se vuelve clave para alcanzar escalabilidad y reducir costos. Aunque Escherichia coli y Pichia pastoris son los hospedadores más utilizados, presentan limitaciones en términos de secreción y escalabilidad. Frente a este escenario, el presente trabajo se enmarca en la optimización de una plataforma de expresión en Corynebacterium glutamicum, un hospedador alternativo con características promisorias para la producción de enzimas industriales. El objetivo de este trabajo fue establecer una plataforma para la producción extracelular de ChPLC en Corynebacterium glutamicum ATCC 13869, un microorganismo GRAS con reconocida capacidad de secreción y ventajas operativas en bioprocesos industriales. Se evaluaron diferentes estrategias de expresión: la integración del gen en el cromosoma y su expresión a partir de plásmidos replicativos, combinadas con alternativas en las señales de secreción, asociadas a las vías Sec y Tat. Se diseñaron y construyeron las correspondientes cepas, cuyos parámetros de crecimiento y producción de la enzima de interés fueron determinados. Para este fin se analizaron distintas condiciones de crecimientos, incluyendo medios definidos y cultivos en batch y de alta densidad celular, con el fin de identificar parámetros clave para optimizar la expresión y secreción de la enzima. Este trabajo sienta las bases para el desarrollo de procesos fermentativos orientados a reemplazar tratamientos químicos convencionales por alternativas más sustentables y eficientes.