Examinando por Autor "Garavaglia, Betiana Soledad"

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    3-methylcrotonyl Coenzyme A (CoA) carboxylase complex is involved in the Xanthomonas citri subsp. citri lifestyle during citrus infection
    (Public Library of Science (PLOS), 2018-06-07) Tomassetti, Mauro; Garavaglia, Betiana Soledad; Vranych, Cecilia Verónica; Gottig, Natalia; Ottado, Jorgelina; Gramajo, Hugo Cesar; Diacovich, Lautaro
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    Caracterización molecular del patógeno vegetal Xanthomonas citri subsp. citri
    (2020) Barcarolo, María Victoria; Ottado, Jorgelina; Garavaglia, Betiana Soledad
    Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) es el agente causal de la cancrosis de los cítricos. Durante el inicio del ciclo de vida de Xcc como epífita, ésta se enfrenta a diferentes situaciones de estrés, particularmente a condiciones con baja disponibilidad de agua y estrés osmótico, los cuales afectan su sobrevida epifítica sobre la superficie de la planta. Mediante análisis proteómicos y fisiológicos de Xcc cultivadas bajo estrés salino, simulando así las condiciones dadas durante la sobrevida bacteriana epifítica, se realizó un análisis exhaustivo de los mecanismos de adaptación de los fitopatógenos frente al estrés durante la colonización del tejido vegetal. El estudio de proteómica mostró que el estrés salino indujo cambios en la abundancia principalmente de proteínas involucradas en la quimiotaxis bacteriana, detoxificación de especies reactivas del oxígeno (ROS) y en el metabolismo del exopolisacárido y de trehalosa. Además, se observaron alteraciones en la fisiología de Xcc bajo estrés salino, presentando una disminución de las motilidades tipo swimming, swarming y twitching, mayor formación de biofilm, aumento de la señal de quorum sensing DSF, mayor resistencia al estrés oxidativo, como así también, un aumento en los niveles de expresión de genes del sistema de secreción tipo III (SSTIII). En el estudio de proteómica, la proteína NAD(P)H deshidrogenasa codificada por el gen XAC2229, presentó la mayor abundancia. Se observó que Xac2229 juega un rol importante en la resistencia bacteriana de Xcc y de E. coli, frente al estrés oxidativo. Xac2229 favorece la sobrevida bacteriana en condiciones oxidativas, y a su vez, sería necesaria para disminuir la acumulación intracelular de ROS y la peroxidación lipídica, limitando el estrés oxidativo. Asimismo, Xac2229 sería necesaria durante la sobrevida epifítica de Xcc sobre el tejido vegetal de la planta de naranjo. Además, se identificó que Xac2229 presenta un comportamiento similar a las flavoproteínas, conteniendo FAD como cofactor. Conjuntamente, Xac2229 se caracterizó enzimáticamente, demostrando que posee actividad NADPH quinona reductasa. Por último, se identificaron y estudiaron dos proteínas de Xcc, Xac0100 y Xac4007, que participarían en la respuesta general a estrés, clasificadas como hidrofilinas. Se observó inducción de la expresión de XAC0100 y XAC4007 frente a diversas situaciones de estrés abiótico, como también durante la interacción planta-patógeno. Por otra parte, se concluyó que Xac0100 y Xac4007 juegan un rol importante en los primeros estadios del ciclo de vida epifítica de Xcc y, a su vez, participarían en la tolerancia frente a diversas situaciones de estrés abiótico. Por otro lado, la adición externa de Xac0100 y Xac4007 logró preservar la sobrevida celular bacteriana, y disminuir la inactivación enzimática de la proteína LDH, protegiendo las estructuras biológicas de los efectos del déficit hídrico. En síntesis, los resultados de este trabajo de tesis contribuyen al conocimiento sobre los mecanismos moleculares que ocurren durante la adaptación de Xcc frente a ambientes adversos, que afectan la progresión de la sobrevida epifítica bacteriana y determinan el desarrollo de la enfermedad.
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    Proteínas bacterianas inducidas por estrés y su potencial aplicación agrícola
    (2019) Demarchi, Mariana; Garavaglia, Betiana Soledad; Barcarolo, María Victoria
    La utilización de microorganismos beneficiosos en asociación con las plantas representa una estrategia sustentable que permite mejorar el desarrollo agrícola de los cultivos. Sin embargo, los microorganismos presentes en los inoculantes a menudo son susceptibles a una extensa variedad de factores, entre ellos la desecación, los cuales impactan de modo negativo sobre la viabilidad celular limitando su eficacia a campo. Con el objetivo de superar estos inconvenientes, comercialmente se desarrollan formulaciones con características particulares a fin de proteger la viabilidad. En el presente trabajo de Tesina se planteó la posibilidad de utilizar proteínas no caracterizadas pertenecientes al género Bradyrhizobium, BSL1473 y BSL2407, como aditivos microbianos. Experimentos de desecación llevados a cabo sobre células de Bradyrhizobium japonicum permitieron afirmar que cuando las proteínas recombinantes fueron utilizadas como suplemento, la tasa de sobrevida celular se vio aumentada respecto a su control. En vista de estos resultados, sería conveniente caracterizar exhaustivamente estas proteínas para así contar con una mayor cantidad de información y poder, en un futuro no muy lejano, utilizarlas en formulados comerciales de inoculantes.
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    The dual nature of trehalose in citrus canker disease: a virulence factor for Xanthomonas citri subsp. citri and a trigger for plant defence responses
    (Oxford University, 2015-03-15) Piazza, Ainelén; Zimaro, Tamara; Garavaglia, Betiana Soledad; Ficarra, Florencia Andrea; Thomas, Ludivine; Marondedze, Claudius; Feil, Regina; Lunn, John E.; Gehring, Chris; Ottado, Jorgelina; Gottig, Natalia
    Xanthomonas citri subsp. citri (Xcc) is a bacterial pathogen that causes citrus canker in susceptible Citrus spp. The Xcc genome contains genes encoding enzymes from three separate pathways of trehalose biosynthesis. Expression of genes encoding trehalose-6-phosphate synthase (otsA) and trehalose phosphatase (otsB) was highly induced during canker development, suggesting that the two-step pathway of trehalose biosynthesis via trehalose-6-phosphate has a function in pathogenesis. This pathway was eliminated from the bacterium by deletion of the otsA gene. The resulting XccΔotsA mutant produced less trehalose than the wild-type strain, was less resistant to salt and oxidative stresses, and was less able to colonize plant tissues. Gene expression and proteomic analyses of infected leaves showed that infection with XccΔotsA triggered only weak defence responses in the plant compared with infection with Xcc, and had less impact on the host plant’s metabolism than the wild-type strain. These results suggested that trehalose of bacterial origin, synthesized via the otsA–otsB pathway, in Xcc, plays a role in modifying the host plant’s metabolism to its own advantage but is also perceived by the plant as a sign of pathogen attack. Thus, trehalose biosynthesis has both positive and negative consequences for Xcc. On the one hand, it enables this bacterial pathogen to survive in the inhospitable environment of the leaf surface before infection and exploit the host plant’s resources after infection, but on the other hand, it is a tell-tale sign of the pathogen’s presence that triggers the plant to defend itself against infection.
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    XacFhaB adhesin, an important Xanthomonas citri ssp. citri virulence factor, is recognized as a pathogen-associated molecular pattern
    (BSPP and Wiley, 2016-11-15) Garavaglia, Betiana Soledad; Zimaro, Tamara; Abriata, Luciano Andrés; Ottado, Jorgelina; Gottig, Natalia
    Adhesion to host tissue is one of the key steps of the bacterial pathogenic process. Xanthomonas citri ssp. citri possesses a non-fimbrial adhesin protein, XacFhaB, required for bacterial attachment, which we have previously demonstrated to be an important virulence factor for the development of citrus canker. XacFhaB is a 4753-residue-long protein with a predicted β-helical fold structure, involved in bacterial aggregation, biofilm formation and adhesion to the host. In this work, to further characterize this protein and considering its large size, XacFhaB was dissected into three regions based on bioinformatic and structural analyses for functional studies. First, the capacity of these protein regions to aggregate bacterial cells was analysed. Two of these regions were able to form bacterial aggregates, with the most amino-terminal region being dispensable for this activity. Moreover, XacFhaB shows features resembling pathogen-associated molecular patterns (PAMPs), which are recognized by plants. As PAMPs activate plant basal immune responses, the role of the three XacFhaB regions as elicitors of these responses was investigated. All adhesin regions were able to induce basal immune responses in host and non-host plants, with a stronger activation by the carboxyl-terminal region. Furthermore, pre-infiltration of citrus leaves with XacFhaB regions impaired X. citri ssp. citri growth, confirming the induction of defence responses and restraint of citrus canker. This work reveals that adhesins from plant pathogens trigger plant defence responses, opening up new pathways for the development of protective strategies for disease control.