Ottado, Jorgelina2025-02-242025-02-242024https://hdl.handle.net/2133/28915Las plantas superiores están de forma continua expuestas a condiciones adversas en su entorno. Por esto, cuando se enfrentan a un estrés biótico hacen frente al mismo a través de una inmunidad innata presente en sus células, o mediante una inmunidad sistémica, la cual se transduce al resto del organismo por medio de moléculas señal. En el presente trabajo de tesis se analizaron los roles desempeñados bajo dicho estrés por parte del receptor AtPNP-R1, el péptido natriurético vegetal AtPNP-A, ambos de A. thaliana y el péptido natriurético bacteriano XacPNP, sintetizado por X. citri subsp. citri. Por medio de la utilización de herramientas bioinformáticas se determinó la presencia de cis-elementos reguladores en la secuencia promotora putativa del gen codificante de AtPNP-R1. Además, se realizó una búsqueda de dominios conservados en la secuencia aminoacídica de las proteínas bajo estudio, pudiéndose establecer los péptidos señal para las mismas, y secuencias LRR para el receptor. También, se realizaron modelados de las secuencias terciarias, observándose una forma curvada general para el receptor vegetal y estructuras similares entre sí para los péptidos natriuréticos, con disposiciones en el espacio de las estructuras secundarias conservadas en este último caso. Por otro lado, se determinaron probables interacciones entre AtPNP-R1 con AtPNP-A y XacPNP, las cuales fueron una base para posteriores estudios in planta. Para ampliar los resultados anteriormente obtenidos se realizaron observaciones por medio de microscopía confocal, utilizando diferentes fusiones a fluoróforos de las proteínas bajo estudio. Se determinaron las localizaciones celulares de las mismas, siendo en el plano de la membrana plasmática asociado a ella para AtPNP-R1, y en el espacio extracelular para los péptidos vegetal y bacteriano. También se realizó una caracterización del movimiento del receptor a lo largo de la membrana plasmática a partir del cual se obtuvieron diferentes parámetros cinéticos. Además, se determinaron las interacciones AtPNP-R1/AtPNP-A y AtPNP-R1/XacPNP in planta. Con el objetivo de analizar el rol de las proteínas bajo estudio en las respuestas activadas frente a condiciones de estrés biótico se realizaron diferentes ensayos. Se observó un fenotipo de menor daño en el tejido infectado, causado por el péptido bacteriano en un contexto génico de presencia del receptor AtPNP-R1. Sumado a esto, se observaron expresiones significativamente aumentadas en los transcriptores correspondientes a AtPNP-A y AtPNP-R1 luego de una infección patogénica. Se amplió dicho resultado por medio de un análisis proteómico en vías de caracterizar las respuestas inducidas por las proteínas bajo estudio. Se determinó que las mismas actúan de forma similar en las modificaciones generadas en el metabolismo de la planta post-infección. Esto último, refuerza la idea de un accionar en conjunto en la activación de respuestas celulares frente a una situación de estrés biótico. Se observó que metabolismos anabólicos fueron reprimidos, mientras que vías de generación de intermediarios moleculares o poder reductor se vieron sobreexpresadas. Probablemente, esto se da con el objetivo de abastecer de componentes necesarios en las respuestas de defensa. Además, los mecanismos de regulación de los niveles de ROS se vieron aumentados, posiblemente con el objetivo de reducir el daño celular e intentar sobrevivir al ataque patogénico. Los resultados obtenidos en este trabajo de tesis ampliaron el conocimiento sobre el accionar de AtPNP-R1 y AtPNP-A de A. thaliana, y XacPNP de X. citri subsp. citri en la activación de respuestas frente a condiciones de estrés biótico. Además, permitieron determinar sus localizaciones celulares y la interacción entre los mismos in vivo. Dichos resultados sientan bases para profundizar en el mecanismo activado como respuesta a estrés biótico, corriente abajo del receptor AtPNP-R1 luego de la interacción con su ligando AtPNP-A, contribuyendo al avance en la investigación básica sobre la interacción planta-patógenoesembargoedAccessXanthomonasPéptidos natriuréticoInteracción planta-patógenotesisAttribution-NonCommercial-ShareAlike 2.5 Argentina