Análisis de la participación de los mecanismos de regulación de la expresión génica por microARNs (miRs) en modelos de hepatotoxicidad experimental
Fecha
2013-12-18
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Editor
Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas.
Resumen
La hepatotoxicidad, el daño al hígado inducido por xenobióticos, involucra una alteración
importante de la expresión génica. Los microARNs (miARNs) son moléculas de ARN pequeñas
que regulan negativamente la expresión génica a nivel post‐transcripcional, y están
involucrados en numerosos procesos fisiológicos y fisio‐patológicos. La técnica de referencia
para determinar los niveles de ARNm y miARNs es la PCR Cuantitativa en Tiempo Real (RT‐
qPCR). Sin embargo, para poder obtener resultados confiables, exactos y precisos mediante
esta técnica, es indispensable contar con un método de normalización apropiado que corrija
las diferencias introducidas entre las muestras durante su manipulación.
En la primera etapa de este trabajo de Tesis se establecieron cuatro modelos
experimentales de hepatotoxicidad aguda en ratas, mediante la administración de
hepatotóxicos tradicionales: acetaminofeno, tetracloruro de carbono, D‐galactosamina y
tioacetamida. Estos modelos se caracterizaron mediante la determinación de actividades
enzimáticas de marcadores de daño hepático y mediante examinación histológica. Sobre estos
modelos se desarrolló una técnica de determinación de la expresión de ARNm y miARNs por
Real Time qPCR (RT‐qPCR), que consistió en la identificación de la combinación de genes
óptima para la normalización de los resultados. Esto se llevó a cabo mediante el empleo de
diferentes software diseñados específicamente para este fin.
El miARN‐122 es un miARN altamente abundante y específico de hígado, donde está
involucrado en funciones críticas del hepatocito, y está asociado a ciertas enfermedades
hepáticas. En la segunda etapa de esta Tesis se estudió la participación del miARN‐122 y sus
mecanismos regulatorios en los modelos de hepatotoxicidad establecidos. Para esto, mediante
la técnica RT‐qPCR desarrollada en la primera etapa del trabajo y mediante Western blot, se
determinó la expresión del miARN‐122 maduro, de su precursor, sus genes blanco, marcadores
de proliferación y diferenciación celular, y aquellos reguladores (globales y específicos) que
pudieran alterar la expresión del miARN‐122. Como conclusión, se postula que los niveles del
miARN‐122 se encuentran bajo un control transcripcional en procesos de hepatotoxicidad, a
través de los factores de transcripción C/EBPα y HNF4α, y se propone que los cambios en la
red regulatoria del miARN‐122 se encuentran asociados a la respuesta del hígado frente a la
lesión causada por las hepatotoxinas, probablemente a través de procesos de proliferación
celular para reparar el tejido dañado.
Descripción
Palabras clave
microARNs, Hepatotoxicidad, Regulación Génica