Examinando por Autor "Marziali, Federico Emanuel"
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Ítem Acceso Abierto Análisis de la expresión de proteínas de polaridad celular y su incumbencia en los procesos oncogénicos asociados a infecciones virales(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2017-03-23) Marziali, Federico Emanuel; Gardiol, DanielaEl mantenimiento de la polaridad celular representa un mecanismo de supresión oncogénica. La interferencia en la expresión de los factores que la regulan es un hecho evidente en la progresión de diferentes tumores. Es por ello que dichos factores constituyen un tema de estudio de gran relevancia. La proteína DLG1 es considerada como un regulador importante de polaridad, siendo capaz de formar complejos multiproteicos en dominios intracelulares específicos. De esta forma, DLG1 contribuye a la formación de las uniones intercelulares adherentes y además regula negativamente la progresión del ciclo celular. La expresión de DLG1 se encuentra afectada en gran medida durante la evolución tumoral, observándose cambios en sus niveles y en su localización subcelular. Al momento, el conocimiento de los mecanismos que regulan sus niveles de expresión es muy pobre e incierto. Dicho conocimiento representaría el punto de partida para la búsqueda de estrategias que permitan revertir los cambios observados. Por ello, parte de este Trabajo de Tesis Doctoral se dedicó al estudio de los mecanismos implicados en la definición de los niveles de DLG1 en contextos biológicos que requieren de una correcta expresión de esta proteína. En este sentido, estudiamos la implicancia de mecanismos transcripcionales y post-transcripcionales, en especial un mecanismo de splicing alternativo descubierto en nuestro laboratorio que tiene lugar en la región 5´ no traducible (5´UTR) del ARN mensajero y es capaz de modular la abundancia de DLG1. Así, aplicando técnicas de cuantificación de transcriptos y de niveles proteicos, exploramos la participación de estos mecanismos bajo diversas circunstancias, como la adhesión celular y la progresión del ciclo celular epitelial, procesos donde DLG1 es particularmente importante. Además, analizamos la existencia del splicing en células provenientes de diversos tejidos pudiendo detectar a su vez la participación de este mecanismo en procesos de diferenciación celular. De este modo, logramos contribuir a la identificación de nuevos mecanismos de regulación para DLG1, los cuales podrían verse afectados en procesos tumorales. Determinados virus oncogénicos pueden tomar ventaja de los reguladores de polaridad para facilitar su ciclo de replicación interfiriendo con la polarización y contribuyendo a la transformación celular. Este es el caso de los virus del papiloma humano de alto riesgo oncogénico (HPV de alto riesgo), asociados estrechamente al desarrollo de carcinomas cervicales y de otros tumores; y del virus linfotrópico de células T del adulto tipo 1 (HTLV-1), considerado como el agente etiológico de la leucemia humana de células T (ATL). Estos virus, con ciclo replicativo diferentes, codifican para oncoproteínas denominadas E6 y Tax1 respectivamente, con actividades similares en cuanto a su capacidad para promover la proliferación celular. En las mismas resalta, sin embargo, la presencia de motivos C-terminales que les permiten interaccionar con reguladores de polaridad, dentro de los cuales se encuentra DLG1, siendo todavía incierta su función como partner de dichas proteínas virales. Por lo tanto, llevamos a cabo una serie de experimentos para profundizar en la significancia biológica de dichas interacciones. En este punto sobresalió la aplicación de la técnica de microscopía de fluorescencia FRET, capaz de detectar interacciones directas entre proteínas. Pudimos observar que la unión a DLG1 por parte de E6 y Tax1 puede implicar consecuencias diferentes, indicando que estos virus oncogénicos pueden hacer un uso distinto de sus partners de polaridad para favorecer su replicación y estimular la transformación celular. En este sentido, detectamos una interacción entre E6 y DLG1 en los bordes celulares y región citoplasmática con posibles consecuencias en la proliferación celular. Además, descubrimos la existencia de una relación dependiente de la abundancia relativa de cada proteína, lo que resulta en diferentes niveles de expresión para cada una de ellas. Estas observaciones contribuyen a comprender el significado biológico de las variaciones detectadas en la expresión de DLG1 durante la evolución de las lesiones cervicales asociadas a infecciones por HPV. En tanto, en relación a la asociación entre Tax1 y DLG1, pudimos detectar su ocurrencia en estructuras semejantes a compartimientos subcelulares definidos. En este caso, luego del análisis de una variedad de organelas celulares, evidenciamos que la asociación Tax1-DLG1 tiene lugar principalmente en la región perinuclear, co-localizando con marcadores del aparato de Golgi y del centrosoma. En dicha región Tax1 podría reclutar a DLG1 como mecanismo que impediría su tráfico a los bordes celulares o bien estimular su participación en mecanismos de traducción de señales, teniendo así una significancia oncogénica. Al mismo tiempo, conociéndose la polarización del centrosoma inducida por Tax1 necesaria para la transmisión del genoma de HTLV-1 a una célula no infectada, es posible que DLG1 pueda cumplir alguna función en dicho proceso. En resumen, teniendo en cuenta los datos alcanzados, este trabajo de Tesis Doctoral aporta al conocimiento integral de los mecanismos que regulan la expresión de DLG1 y además contribuye al entendimiento de la forma en que los HPV del alto riesgo y el HTLV-1 pueden utilizar o interferir con esta proteína de polaridad para promover funciones relacionadas a la transformación celular. Este trabajo también robustece la idea de la existencia de mecanismos comunes de patogénesis viral donde la asociación con proteínas de polaridad puede relacionarse con el ciclo de replicación y el desarrollo de patologías.Ítem Acceso Abierto Differential expression of DLG1 as a common trait in different human diseases: an encouraging issue in molecular pathology(De Gruyter, 2019-04-02) Marziali, Federico Emanuel; Dizanzo, María Paula; Cavatorta, Ana Laura; Gardiol, DanielaHuman disc large (DLG1) is a scaffolding protein that through the interaction with diverse cell partners participates in the control of key cellular processes such as polarity, proliferation and migration. Experimental data have mainly identified DLG1 as a tumor suppressor. An outstanding point for DLG1 protein is that altered DLG1 expression and DLG1 gene mutations were observed in different pathologies, including cancer and neurological and immunological disorders. Evident changes in DLG1 abundance and/or cell localization were identified in a number of studies suggesting its participation in molecular mechanisms responsible for the development of such illnesses. In this review, we focus on some of the latest findings regarding DLG1 alterations in different diseases as well as its potential use as a biomarker for pathological progression. We further address the current knowledge on the molecular mechanisms regulating DLG1 expression and the posttranslational modifications that may affect DLG1 cell localization and functions. Despite the advances in this field, there are still open questions about the precise molecular link between alterations in DLG1 expression and the development of each specific pathology. The complete understanding of this concern will give us new scenarios for the design of promising diagnosis and therapeutic tools.Ítem Acceso Abierto Disc Large 1 expression is altered by Human Papillomavirus E7/E6 proteins in organotypic cultures of human keratinocytes(Microbiology Society, 2016-02) Bugnon Valdano, Marina Paula; Cavatorta, Ana Laura; Morale, Miriam; Marziali, Federico Emanuel; Steenbergen, Renske; Boccardo, Enrique; Gardiol, DanielaÍtem Acceso Abierto DLG1 polarity protein expression associates with the disease progress of low-grade cervical intraepithelial lesions(Elsevier) Cavatorta, Ana Laura; Di Gregorio, Alejandra; Bugnon Valdano, Marina Paula; Marziali, Federico Emanuel; Cabral, Mariela; Bottai, Hebe; Cittadini, Jorge; Nocito, Ana Lía; Gardiol, DanielaÍtem Embargo Hepatitis E, un virus emergente: desarrollo de herramientas diagnósticas, análisis del escenario epidemiológico en la zona núcleo maicera de Argentina y su impacto en pacientes inmunosuprimidos(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, 2025) Acosta, Julián; Cavatorta, Ana Laura; Marziali, Federico EmanuelEl Virus de la Hepatitis E (HEV), de transmisión entérica, es uno de los principales agentes causantes de hepatitis aguda en todo el mundo, con cuatro genotipos principales (HEV-1 a 4) que afectan a los humanos. Es considerada una zoonosis emergente, que se disemina principalmente a través de los alimentos en los países en desarrollo y/o con pobres condiciones sanitarias. La Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que anualmente se registran más de 20 millones de infecciones y 40.000 fallecimientos, lo que la posiciona como una de las principales causas de mortalidad por hepatitis aguda de origen viral en el mundo, constituyendo un desafío significativo para la Salud Pública. En este contexto, la complejidad del problema demanda una gestión integrada que contemple la salud humana, animal y ambiental, bajo el concepto de Una Salud. El desconocimiento de la verdadera magnitud de la infección y la ausencia de herramientas diagnósticas confiables representan un problema concreto para grupos de riesgo como los pacientes inmunosuprimidos o con hepatopatías crónicas. Con un mejor conocimiento del peso de la infección y las vías de transmisión en nuestra población, y disponiendo de metodologías diagnósticas eficaces, dicho riesgo podría reducirse. Por lo tanto, el objetivo general de esta tesis consistió en optimizar técnicas sensibles y específicas que aporten a mejorar el diagnóstico y monitoreo del virus en poblaciones humanas, animales y en el medioambiente, promoviendo el desarrollo y aplicación de tecnología regional. En primer lugar, optimizamos una reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa en tiempo real (RT-qPCR) con control interno, para aumentar la performance de las metodologías utilizadas actualmente en nuestro medio. Los resultados obtenidos subrayan la relevancia de haber logrado desarrollar una metodología superadora a la utilizada en la mayoría de los laboratorios bioquímicos y reportes académicos de Argentina, a la cual denominamos HEV/MS2 dúplex RT-qPCR, aportando ventajas en relación al diagnóstico de la infección. Posteriormente, al disponer de esta herramienta demostramos la circulación del HEV en cerdos de establecimientos comerciales localizados en distintos lugares de la zona núcleo maicera de nuestro país, lo que resulta clave considerando que estos animales representan uno de los principales reservorios del virus y el crecimiento de la producción porcina en nuestra región. Por otro lado, considerando la relevancia clínica de la infección por HEV, realizamos un estudio en individuos inmunocomprometidos por diversas etiologías. Asimismo, efectuamos el seguimiento de una cohorte de pacientes con enfermedad hepática crónica durante dos años. Los resultados obtenidos confirmaron el mayor impacto de la infección en estos grupos vulnerables, en comparación con las poblaciones control y general. Al mismo tiempo, resaltaron la importancia de considerar el contexto epidemiológico como un factor clave en la infección por HEV en nuestra región. Otro aspecto para destacar de este trabajo de tesis es que, por primera vez en Argentina, logramos demostrar un vínculo epidemiológico en un productor porcino que desarrolló hepatitis aguda debido a una infección por HEV. Este hallazgo confirma la transmisión zoonótica viral y respalda la asociación entre exposiciones ocupacionales y el mayor riesgo de contraer hepatitis E. Finalmente, y una vez demostrada la circulación de HEV en la región, tanto en animales como en humanos, decidimos profundizar el estudio de esta zoonosis bajo el enfoque de Una Salud. Por ello, planteamos como último objetivo sentar las bases para evaluar el escenario epidemiológico del HEV en el medioambiente, específicamente en matrices acuosas, con la hipótesis de que el agua puede actuar como una fuente de diseminación viral. En este sentido, desarrollamos una técnica de concentración de partículas virales con la incorporación de un control interno, la cual fue validada en aguas de distintos orígenes, obteniendo resultados reproducibles y dentro del rango de sensibilidad del ensayo. En conclusión, esta metodología representa una alternativa sensible, reproducible y de bajo requerimiento instrumental para la detección del HEV en el ambiente. En función de lo expuesto, este trabajo de tesis resalta la importancia de haber conformado un equipo multidisciplinario integrado por profesionales de las áreas de salud humana, animal y ambiental. Este enfoque colaborativo permitió la generación de nuevos conocimientos, aportando de manera significativa a la comprensión del escenario epidemiológico del HEV en nuestra región.Ítem Acceso Abierto HPV E6 and E7 oncoproteins cooperatively alter the expression of Disc Large 1 polarity protein in epithelial cells(BMC, 2020-04-07) Dizanzo, María Paula; Marziali, Federico Emanuel; Brunet Avalos, Clarise; Bugnon Valdano, Marina Paula; Leiva, Santiago Gabriel; Cavatorta, Ana Laura; Gardiol, DanielaBackground: Persistent infection with high-risk Human Papillomavirus (HPVs) is associated with the development of cervical cancer. The transforming capacity of these viruses relies on the cooperative action of the E6 and E7 viral oncoproteins. Among the oncogenic activities of E6, the interaction and interference with cell polarity PDZ proteins have been well established. One of the most characterized PDZ targets of HPV E6 is human Disc large 1 (DLG1), a scaffolding protein involved in the control of cell polarity and proliferation. Interestingly, in cervical squamous intraepithelial lesions, alterations in DLG1 expression were observed in association to tumour progression. Moreover, the expression of both HPV E6 and E7 proteins may be responsible for the changes in DLG1 abundance and cell localization observed in the HPV-associated lesions. Methods: Due to the relevance of DLG1 deregulation in tumour development, we have performed an in-depth investigation of the expression of DLG1 in the presence of the HPV oncoproteins in epithelial cultured cells. The effects of HPV E6 and E7 proteins on DLG1 abundance and subcellular localization were assessed by western blot and confocal fluorescence microscopy, respectively. Results: We demonstrated that the relative abundance of HPV-18 E6 and DLG1 is a key factor that contributes to defining the expression abundance of both proteins. We also show here that a high expression level of DLG1 may negatively affect HPV-18 E6 nuclear expression. Moreover, the co-expression of HPV-18 E6 and E7 produces a striking effect on DLG1 subcellular localization and a co-distribution in the cytoplasmic region. Interestingly, HPV-18 E7 is also able to increase DLG1 levels, likely by rescuing it from the E6-mediated proteasomal degradation. Conclusions: In general, the data suggest that HPV-18 E6 and E7 may have opposing activities in regards to the regulation of DLG1 levels and may cooperatively contribute to its subcellular redistribution in the HPV context. These findings constitute a step forward in understanding the differential expression of DLG1 during tumour progression in an HPV-associated model.Ítem Acceso Abierto Human papillomavirus (HPV)-18 E6 oncoprotein interferes with the epithelial cell polarity Par3 protein(Federation of European Biochemical Societies, 2014-01-14) Facciuto, Florencia Natalia; Bugnon Valdano, Marina Paula; Marziali, Federico Emanuel; Massimi, Paola; Banks, Lawrence; Cavatorta, Ana Laura; Gardiol, DanielaÍtem Embargo Interacción entre proteínas de polaridad celular y oncoproteínas virales: Aplicación de técnicas de microscopía de fluorescencia de avanzada(Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2017) Brunet Avalos, Clarise; Gardiol, Daniela; Marziali, Federico EmanuelEl establecimiento y mantenimiento de la polaridad celular son procesos que aseguran la correcta división, crecimiento y proliferación celular. Debido a su naturaleza, estos mecanismos poseen características oncosupresoras y son regulados por proteínas de polaridad celular. Estas, y en particular DLG1, se ven afectadas en los procesos oncogénicos, incluyendo a aquellos que se desarrollan en el marco de una infección por virus oncogénicos; tal es el caso de los virus del papiloma humano de los tipos de alto riesgo oncogénico (HPV), asociados al desarrollo de cáncer cervical. Determinadas proteínas virales aprovechan su capacidad de interacción con reguladores de polaridad, para facilitar su replicación, interfiriendo con la polarización y contribuyendo a la transformación celular. Así, la oncoproteína viral E6, presenta motivos C-terminales que pueden interactuar con DLG1. No obstante, poco se conoce sobre los efectos de dicha interacción sobre los procesos carcinogénicos, por tanto realizamos experimentos que nos permitieran conocer sus implicancias biológicas, atendiendo principalmente a la distribución subcelular y los niveles de expresión de las proteínas involucradas. En este punto, recurrimos a la aplicación de novedosas técnicas de microscopía de fluorescencia. En resumen, nuestras observaciones contribuyeron a comprender mejor la evolución de las lesiones cervicales asociadas a infecciones por HPV.Ítem Acceso Abierto Interference of HTLV-1 Tax Protein with Cell Polarity Regulators: Defining the Subcellular Localization of the Tax-DLG1 Interaction(MDPI, 2017-11-23) Marziali, Federico Emanuel; Bugnon Valdano, Marina Paula; Brunet Avalos, Clarise; Moriena, Lucía; Cavatorta, Ana Laura; Gardiol, DanielaÍtem Acceso Abierto Transcriptional and translational mechanisms contribute to regulate the expression of Disc Large 1 protein during different biological processes(De Gruyter, 2015-03-14) Marziali, Federico Emanuel; Cavatorta, Ana Laura; Bugnon Valdano, Marina Paula; Facciuto, Florencia Natalia; Gardiol, Daniela; ; ; ; ; ;