Examinando por Autor "Girardini, Javier"

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    Akap350 recruits Eb1 to the spindle poles, ensuring proper spindle orientation and lumen formation in 3d epithelial cell cultures
    (Springer Nature, 2017-11-02) Almada, Evangelina; Tonucci, Facundo Mauro; Hidalgo, Florencia; Ferretti, Anabela Cecilia; Pariani, Alejandro Pedro; Favre, Cristian; Larocca, María Cecilia; Ibarra, Solange; Vena, Rodrigo; Girardini, Javier; Kierbel, Arlinet
    The organization of epithelial cells to form hollow organs with a single lumen requires the accurate three-dimensional arrangement of cell divisions. Mitotic spindle orientation is defined by signaling pathways that provide molecular links between specific spots at the cell cortex and astral microtubules, which have not been fully elucidated. AKAP350 is a centrosomal/Golgi scaffold protein, implicated in the regulation of microtubule dynamics. Using 3D epithelial cell cultures, we found that cells with decreased AKAP350 expression (AKAP350KD) formed polarized cysts with abnormal lumen morphology. Analysis of mitotic cells in AKAP350KD cysts indicated defective spindle alignment. We established that AKAP350 interacts with EB1, a microtubule associated protein that regulates spindle orientation, at the spindle poles. Decrease of AKAP350 expression lead to a significant reduction of EB1 levels at spindle poles and astral microtubules. Conversely, overexpression of EB1 rescued the defective spindle orientation induced by deficient AKAP350 expression. The specific delocalization of the AKAP350/EB1complex from the centrosome decreased EB1 levels at astral microtubules and lead to the formation of 3D-organotypic structures which resembled AKAP350KD cysts. We conclude that AKAP350 recruits EB1 to the spindle poles, ensuring EB1 presence at astral microtubules and proper spindle orientation during epithelial morphogenesis.
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    Caracterización de mecanismos moleculares de agresividad tumoral activados por p53 mutante
    (2019) Borini Etichetti, Carla María; Girardini, Javier
    La presencia de mutaciones en el gen que codifica al supresor tumoral p53 constituye una de las alteraciones genéticas más frecuentes en el cáncer. La mayoría de dichas mutaciones son del tipo missense, lo que conduce a la expresión abundante de proteínas mutantes de longitud completa. Las mutantes de p53 no solo pierden la función de supresor tumoral, sino que también pueden adquirir nuevas actividades que promueven la progresión tumoral. A pesar de las evidencias que demuestran que p53 mutante aumenta la agresividad tumoral, los mecanismos que subyacen a esta actividad han sido poco caracterizados. Un aspecto notable de muchas mutantes puntuales de p53 es su capacidad de alterar la expresión génica, aún cuando la mutación anula su capacidad de actuar como un factor de transcripción. Con el fin de comprender en mayor profundidad este fenómeno, en el presente trabajo de tesis estudiamos la relación entre la familia de p53 y la expresión de ICMT, identificado por nuestro grupo como un gen inducido por p53 mutante. ICMT juega un papel clave en la regulación de proteínas preniladas, catalizando la carboximetilación del extremo C-terminal. A pesar de las crecientes evidencias que sugieren que las alteraciones en la red de proteínas preniladas pueden afectar la progresión tumoral, la regulación de este complejo proceso de modificación post- traduccional y el papel específico de ICMT no se comprenden completamente. Nuestro trabajo revela un vínculo entre el procesamiento posterior a la prenilación y la vía de p53. Descubrimos que los miembros de la familia p53 afectan la expresión de ICMT de diferentes maneras. Las proteínas relacionadas con la supresión tumoral, como p53 wild type (wt) e isoformas TAp63 y TAp73, mostraron un efecto negativo sobre la expresión de ICMT, lo que sugiere que este gen está bajo una regulación precisa en células normales. Por el contrario, la expresión de ICMT se vio potenciada por los mutantes puntuales de p53, lo que apoya la noción de que el estado de p53 afectaría los niveles de ICMT durante la progresión tumoral. A su vez, demostramos que la sobreexpresión de ICMT contribuye con fenotipos agresivos in vitro e in vivo. Además, encontramos una correlación entre el estado de p53 y la expresión de ICMT en pacientes con cáncer de mama y pulmón. En conjunto, nuestros resultados sugieren que la interrelación funcional entre los miembros de la familia p53 y las formas mutantes de p53 aumenta los niveles de ICMT durante la tumorigénesis, y de esta forma, coopera con la activación de mecanismos de agresividad tumoral.
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    Diseño y síntesis de novedosos compuestos quirales derivados de biomasa potencialmente activos
    (2021) Tsai, Yi-Hsuan; Sarotti, Ariel Marcelo; Girardini, Javier
    La búsqueda de nuevas materias primas quirales provenientes de fuentes renovables que sirvan de base para el desarrollo de compuestos químicos con potencial farmacológico resulta una prioridad tanto a nivel académico como industrial. Una de las alternativas consiste en la pirólisis de material celulósico para obtener diversas moléculas plataforma útiles. En particular, levoglucosenona, una cetona bicíclica enantioméricamente pura, ha sido empleada como sintón quiral en la síntesis de varios compuestos con interesante actividad biológica. En vista de lo anterior, en este trabajo de Tesis se procedió a continuar explorando la utilidad sintética de levoglucosenona en la preparación de novedosos compuestos bioactivos. Para ello, se previó el empleo de reacciones click para realizar una amplia exploración del espacio químico en miras de hallar relaciones de estructura-actividad y poder consecuentemente desarrollar racionalmente compuestos más activos. Por una parte, se funcionalizó la posición C-4 de levoglucosenona aprovechando la notable reactividad del sistema carbonílico α,β-insaturado como aceptor de Michael. La estrategia sintética se basó en una adición hetero-Michael, seguida de una cicloadición 1,3-dipolar catalizada por Cu(I) para formar triazoles e isoxazoles. Por otra parte, se exploró la funcionalización en posición C-2 del anhidroazúcar para la síntesis de tiosemicarbazonas. La elucidación estructural de varios productos estuvo acompañada de cálculos computacionales y análisis por difracción de rayos X. Asimismo, se estudiaron los mecanismos en detalle mediante espectroscopía de RMN 1H y fundamentados con cálculos del tipo DFT. La actividad antiproliferativa de todos los compuestos sintetizados fue evaluada contra diversas líneas celulares de cáncer y se analizó la selectividad hacia p53 mutante. A su vez, se los ensayó como agentes antituberculosos frente a la cepa H37Ra de M. tuberculosis. En función de los resultados obtenidos, se pudieron establecer valiosas relaciones de estructura-actividad, las cuales permitieron incrementar el potencial sintético de levoglucosenona hacia la síntesis de compuestos bioactivos. A causa de una estancia doctoral realizada en el grupo del Dr. Kerry Gilmore, Max- Planck-Institut für Kolloid- und Grenzflächenforschung, se estudió la aplicabilidad del sistema de Reactores Micro Batch Seriados para la formación de reactivos organozinc en flujo con su posterior aplicación in situ. Los resultados logrados demostraron la viabilidad de esta metodología para las transformaciones que involucren sólidos.
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    Lípidos como moléculas señal durante la diferenciación de células madre
    (Universidad Nacional de Rosario. Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas., 2018) Montaner, Aneley Natalia; Banchio, Claudia; Girardini, Javier
    En este trabajo de Tesis se demuestra cómo ciertos lípidos son capaces de regular la diferenciación de células madre neurales (NSCs). Estas células, presentes en el cerebro adulto, tienen la capacidad de migrar y diferenciarse a neuronas luego de una lesión cerebral. Sin embargo, debido a que el proceso de regeneración neuronal no es completo, surge la necesidad de identificar moléculas que tengan la capacidad de aumentar el proceso de diferenciación en NSCs. Como modelo de estudio, se utilizaron NSCs embrionarias obtenidas de la corteza lateral de ratones de 13-15 días de gestación, amplificadas mediante el método de neuroesferas. En primer lugar, se demostró que diferentes fosfolípidos inducen la diferenciación neuronal de manera selectiva: fosfatidilcolina (PC) promueve la diferenciación neuronal, mientras que fosfatidiletanolamina (PE) aumenta la población de astrocitos. En base a estos resultados, se decidió estudiar de qué manera ambos fosfolípidos regulan el proceso de diferenciación. Se comprobó que la población de progenitores neuronales y astrogliales no se altera en presencia de PC o PE, es decir, no se promueve la proliferación celular de progenitores específicos. Además, tampoco se modifica el número de células viables, demostrando así que los fosfolípidos no ejercen efecto neuroprotector. Al mismo tiempo, se evidenció que el aumento en la diferenciación no ocurre por una aceleración del proceso de diferenciación neuronal o astroglial. Mediante la utilización de microscopía de lapso de tiempo y del análisis por inmunofluorescencia de las poblaciones celulares presentes en el cultivo de NSCs, se demostró que tanto PC como PE actúan en la población de células post-mitóticas. Específicamente, PC promueve la diferenciación neuronal alterando el destino de células precursoras astrogliales e indiferenciadas. Por otro lado, PE induce la diferenciación astroglial a expensas de una disminución en la población de células indiferenciadas. Posteriormente, se estudiaron los mecanismos moleculares involucrados en cada caso, y se comprobó que PC activa la vía de señalización PKA/CREB, así como PE promueve la diferenciación astroglial por un mecanismo dependiente de la activación de la vía de señalización MEK-ERK. Desde el punto de vista terapéutico, es importante que los lípidos modifiquen la especificación de NSCs en ambientes reactivos de daño cerebral. Por este motivo, se estudió el efecto de PC en una condición de estrés oxidativo. Se utilizó el compuesto peróxido de hidrogeno para generar estrés oxidativo en cultivos de NSCs, y se demostró que PC promueve la diferenciación neuronal, aún en condiciones de daño cerebral. En conjunto, los resultados presentados en este trabajo de Tesis contribuyen al conocimiento de los mecanismos que regulan la diferenciación de NSCs y aportan herramientas para el desarrollo de nuevas estrategias para inducir la diferenciación neuronal de NSCs en condiciones de daño celular.
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    Mecanismos moleculares de agresividad tumoral: rol de aldosa reductasa y su relación con la vía de p53
    (2019) Di Benedetto, Carolina; Girardini, Javier
    AKR1B1 es una NADPH oxidorreductasa que cataliza la conversión de aldehídos a alcoholes. Su amplia especificidad de sustrato le permite intervenir en el metabolismo de gran variedad de compuestos, tales como glucosa, peróxidos lipídicos reactivos y prostaglandinas. En base a resultados previos, en este trabajo de tesis se analizó la relación entre la expresión de AKR1B1 y miembros de la vía de p53. Encontramos que tanto p53 wt como mutantes puntuales de p53 asociadas a tumores regulan negativamente la expresión de AKR1B1 en células tumorales. Estudios de luciferasa permitieron identificar la región comprendida entre el -24 y el +14 como la responsable de dicho efecto represivo. Mediante ensayos de chIP, se observó que p53 wt y mutante son reclutados en el promotor de AKR1B1. Más aún, el análisis de bases de datos de pacientes con cáncer de mama reveló una correlación entre el nivel de expresión de AKR1B1 y el status de p53. Empleando ensayos de luciferasa también demostramos que las isoformas supresoras tumorales TAp63 y TAp73α reprimen la actividad reportera de AKR1B1, mientras que las isoformas pro-tumorales ΔNp63 y ΔNp73α la aumentan. En particular, se observó un fuerte efecto activador de ΔNp63β, que resulta en un incremento en los niveles de ARNm de AKR1B1. En conjunto, estos resultados sugieren que la expresión de AKR1B1 está condicionada por la presencia de diferentes miembros de la familia de p53 y por su interrelación funcional. Estudios realizados a fin de comprender la función de AKR1B1 en el cáncer sugieren un rol complejo. En líneas celulares tumorales mamarias, la inhibición de AKR1B1 disminuyó la capacidad migratoria e invasiva. Asimismo, su sobreexpresión redujo los niveles del marcador epitelial E-cadherina y aumentó la invasión in vitro y el crecimiento tumoral y la metástasis in vivo, indicando que AKR1B1 colabora con la progresión tumoral. Sin embargo, tanto la sobreexpresión como la inhibición de AKR1B1 en células tumorales mamarias produjeron una disminución en la capacidad clonogénica. El análisis de bases de datos de pacientes con cáncer de mama apoya la idea de que AKR1B1 ejerce un rol complejo en esta patología. Por un lado, no se encontró una correlación entre el nivel de expresión de este gen y la supervivencia de pacientes con cáncer de mama en el análisis sobre la totalidad de los casos incluidos en las bases de datos utilizadas. En cambio, mayores niveles de expresión de AKR1B1 se correlacionan con un mejor pronóstico de la enfermedad en pacientes con cáncer de mama de subtipo Basal. Colectivamente, nuestros resultados sugieren que los efectos de AKR1B1 sobre los fenotipos tumorales son complejos, y se ven fuertemente influenciados por los niveles de dicha enzima, así como también por el contexto celular.
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    Repositioning metformin and propranolol for colorectal and triple negative breast cancers treatment
    (Nature Research, 2021-04-14) Anselmino, Luciano ; Baglioni, M. V.; Malizia, Florencia; Cesatti Laluce, N.; Borini Etichetti, Carla María; Martínez Marignac, V. L.; Rozados, Viviana; Scharovsky, O. G.; Girardini, Javier; Rico, María José ; Menacho Márquez, Mauricio
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    Specific phospholipids regulate the acquisition of Neuronal and astroglial identities in post-mitotic cells
    (Springer Nature, 2018-01-11) Montaner, Aneley Natalia; Da Silva Santana, Themis Taynah; Schroeder, Timm; Einicker-Lamas, Marcelo; Girardini, Javier; Romualdo Costa, Marcos; Banchio, Claudia